[發明專利]miR-21和miR-92a作為檢測并區分HBV相關肝癌與乙型肝炎的標志物的應用

有效

• 申請號: 202010184874.2
• 申請日: 2020-03-17
• 公開（公告）號: CN111560467B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 王通;羅彥彰;林欣儀;崔毅峙
• 申請（專利權）人: 暨南大學;廣州海力特生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 胡輝

本發明首次公開了miR?21和miR?92a作為檢測并區分HBV相關肝癌與乙型肝炎的標志物的應用。通過聯合檢測血清sEV中的miR?21和miR?92a，可高效地診斷CHB和HBV相關HCC，也可在HBV感染人群中區分CHB與HCC。而且診斷功效高，AUC達0.88，且上樣量低，只需要200μL血清。診斷CHB與診斷HBV相關HCC的功效較高，可與健康人區分開，AUC達0.97以上。上樣量低，也只需要200μL血清。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，更具體地，涉及miR-21和miR-92a作為檢測并區分HBV相關肝癌與乙型肝炎的標志物的應用。

背景技術

外泌體是一種細胞分泌的細胞外囊泡(extracellular?vesicle,EV)，大小約為30-150nm，內含功能性的核酸和蛋白質，是細胞間通訊中的重要一環。腫瘤細胞可通過外泌體特異性地分泌癌癥相關的生物分子，從而促進癌癥的發生發展。而且，外泌體可分泌到外周血中，具有溯源性，通過抽血的手段即可檢測來源于腫瘤的外泌體。因此，外泌體是重要的疾病生物標志物來源。

在外泌體相關研究中，因為尚無外泌體特異性生物標志物，且難以追蹤分離出來的外泌體是否起源于內含體(endosome)，因此越來越多的研究更傾向于用“小細胞外囊泡”(small?extracellular?vesicle,sEV)這個詞來替代“外泌體”。這種sEV是指小于200nm的EV。

微小RNA(microRNA,miRNA)是一種小片段單鏈RNA，參與調控生物進程。在多種癌癥中，腫瘤細胞的miRNA譜都發生改變。已有大量文獻表明血清或血漿中的miRNA可作為腫瘤的潛在生物標志物。在外周血中，miRNA主要以3種形式存在：游離的miRNA，與蛋白質結合的miRNA，以及存在于EV中的miRNA。但是，游離的miRNA容易被體內的RNA酶降解，與蛋白質結合的miRNA難以分離檢測，只有存在于EV中的miRNA是最穩定、最容易被檢測的。因此，直接檢測血清或血漿中的miRNA，受到的干擾相對較大，可能存在某些微量的miRNA難以被檢出，或同一種miRNA的量在不同人中差異較大的情況。事實上，同一種血清或血漿miRNA的量，在不同文獻中報道的變化趨勢可能是相反的。例如，有文獻表明血清中miR-92a在肝癌中是顯著上調的，有文獻卻表明該miRNA是顯著下調的。因此，檢測血清/血漿sEV中的miRNA，比起直接檢測血清/血漿中的miRNA，更準確、更可靠，使得在血清/血漿sEV中尋找miRNA生物標志物具有更重要的意義。

此外，血清/血漿sEV中某種miRNA的量是難以預測的，需要用大量的臨床樣品驗證。在血清/血漿sEV?miRNA的研究中，不同文獻中可能出現相互沖突的結論。例如，血清/血漿sEV中的miR-21和miR-92a是被廣泛報道的結直腸癌生物標志物，但我們的用了大量的臨床樣品證明血清sEV中miR-21和miR-92a的診斷功效均較低(詳見實施例2)。因此，從少數文獻或樣品中得出的結論，并不能輕易地推廣到所有臨床樣品中。

慢性乙型肝炎(chronic?hepatitis?B,CHB)是由乙型肝炎病毒(hepatitis?Bvirus,HBV)持續感染引起的肝臟慢性炎癥性疾病。HBV感染人群十分龐大，全球約20億人曾感染HBV，其中有2.4億人為慢性HBV感染者。與其它肝病相比，CHB和HBV相關HCC是占比最大、對健康影響最大、最受關注的疾病。如何監控CHB并從中及早篩查發現HCC，盡量避免CHB惡化成HCC，成為領域內重大問題。

目前對HBV感染或CHB的血清學檢測，主要以“乙肝兩對半”為主，即檢測HBV相關的抗原抗體。對HCC的血清學檢測，主要以甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)為主。這種基于免疫法的檢測，難以檢測極微量的蛋白質，也難以檢測極早期的病變，使得診斷和治療滯后，錯過最佳時期。尋找更加靈敏、高效的血清生物標志物，顯得十分重要。