[發(fā)明專利]一種診斷用對羥基苯甲酸羥化酶及其制備方法和應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010184842.2 | 申請日： | 2020-03-17 |
| 公開（公告）號： | CN111334483B | 公開（公告）日： | 2023-04-25 |
| 發(fā)明（設計）人： | 李本濤;黃任平;李仕亮 | 申請（專利權(quán)）人： | 湖南新大陸生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12Q1/46;C12Q1/26 |
| 代理公司： | 福州市景弘專利代理事務所(普通合伙) 35219 | 代理人： | 林祥翔;黃以琳 |
| 地址： | 410000 湖南省長沙市高新開發(fā)區(qū)谷苑路*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 診斷 羥基 苯甲酸 羥化酶 及其 制備 方法 應用 | ||
1.?一種診斷用對羥基苯甲酸羥化酶，其特征在于，編碼所述的對羥基苯甲酸羥化酶基因的核苷酸序列如SEQ?ID?No.1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的診斷用對羥基苯甲酸羥化酶，其特征在于，所述的對羥基苯甲酸羥化酶的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示。
3.一種如權(quán)利要求1或2所述的診斷用對羥基苯甲酸羥化酶的制備方法，其特征在于，所述的制備方法包括如下步驟：
從施氏假單胞菌提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，PCR擴增對羥基苯甲酸羥化酶基因
將對羥基苯甲酸羥化酶基因
將重組表達載體轉(zhuǎn)化DH5a菌株；
將測序正確的重組表達載體轉(zhuǎn)化表達宿主；
經(jīng)過異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷誘導表達和Ni柱親和層析純化、脫鹽、濃縮之后，制成酶制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的診斷用對羥基苯甲酸羥化酶的制備方法，其特征在于，所述的表達載體包括pET-28a、pET-32a，或pCold?TF其中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的診斷用對羥基苯甲酸羥化酶的制備方法，其特征在于，所述的表達宿主包括大腸桿菌、芽孢桿菌、酵母菌、昆蟲細胞或哺乳動物細胞其中的一種。
6.一種如權(quán)利要求1或2所述的診斷用對羥基苯甲酸羥化酶在制備膽堿酯酶檢測試劑中的應用。
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