[發明專利]利用陽離子多聚體DNA復合物促進AAV介導的基因表達方法

在審

• 申請號: 202010184761.2
• 申請日: 2020-03-17
• 公開（公告）號: CN111363761A
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 邵嘉紅;張宗德;談鵬程;趙曉明;吳相;盛必成
• 申請（專利權）人: 蘇州吉恒基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/864
• 分類號: C12N15/864
• 代理公司: 南京利豐知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32256
• 代理人: 王茹;王鋒

本發明公開了一種利用陽離子多聚體DNA復合物促進AAV介導的基因表達方法。所述基因表達方法包括：優選以包含目標基因的AAV載體、輔助DNA與帶正電荷的細胞轉染試劑共孵育后共轉染宿主細胞；或者，先以輔助DNA與帶正電荷的細胞轉染試劑孵育形成的陽離子多聚體DNA復合物和包含目標基因的AAV載體中的任意一者轉染宿主細胞，之后以其中的另一者在設定時間內轉染所述宿主細胞。本發明通過利用陽離子多聚體的本身特性，將其與AAV介導的基因治療聯合起來，進而提高AAV介導的基因表達效果，提高基因表達效率，并加強AAV介導的基因治療效果，對推動基因治療、細胞治療、細胞工程等領域發展有重要的意義。

技術領域

本發明涉及一種促進AAV介導的基因表達方法，具體的，尤其涉及一種利用陽離子多聚體DNA復合物促進AAV介導的基因表達方法，屬于基因工程技術領域。

背景技術

基因治療是現在人類治療腫瘤、傳染病、遺傳病的重要技術手段，指將特定的外源基因通過多種方式導入到目的細胞內以達到治療甚至徹底治愈疾病的一種有效的方案。其中基因治療最為關鍵的技術，即選用合適方式或者載體將用來治療的外源基因，穩定、安全地導入目的細胞中，并高效的進行治療。不同的方式和載體的遞送效率，極大的影響著后續的研究和臨床治療效果。因此，發明出一種用于高效促進載體表達的方法是亟需必要的。

目前，用于基因遞送的載體主要分為病毒載體和非病毒載體。AAV作為重要的病毒載體，在科學研究和臨床應用中都有著很廣泛的應用。AAV是一種細小病毒，自然缺陷、無包被和無致病原性。AAV基因組是一個線性、單鏈DNA(ssDNA)分子，由4680個核苷酸構成，在每個末端含有一個145個堿基組成的末端重復序列(ITR)。隨著AAV的研究發展，其在科學研究和臨床應用上逐步成為主要的基因載體。因此有效的提高AAV介導的基因治療是十分必要的。

發明內容

本發明的主要目的在于提供一種利用陽離子多聚體DNA復合物促進AAV介導的基因表達方法，以克服現有技術中的不足。

為實現前述發明目的，本發明采用的技術方案包括：

本發明實施例提供了一種利用陽離子多聚體DNA復合物促進AAV介導的基因表達方法，其包括：

以包含目標基因的AAV載體、輔助DNA與帶正電荷的細胞轉染試劑共孵育后共轉染宿主細胞；

或者，先以輔助DNA與帶正電荷的細胞轉染試劑孵育形成的陽離子多聚體DNA復合物和包含目標基因的AAV載體中的任意一者轉染宿主細胞，之后以其中的另一者在設定時間內轉染所述宿主細胞。

在一些優選實施例中，所述基因表達方法包括：

以包含目標基因的AAV載體、輔助DNA與帶正電荷的細胞轉染試劑共孵育后共轉染宿主細胞；

或者，先以輔助DNA與帶正電荷的細胞轉染試劑共孵育后轉染宿主細胞，之后再在選定時間內以包含目標基因的AAV載體轉染所述宿主細胞，所述設定時間小于24h，優選小于12h，更優選為6h以內；

或者，先以包含目標基因的AAV載體轉染宿主細胞，之后再在選定時間內以輔助DNA與帶正電荷的細胞轉染試劑共孵育后轉染所述宿主細胞，所述設定時間小于24h以內，優選小于6h；其中同時轉染為最佳。

進一步地，所述基因表達方法包括：

將輔助DNA與帶正電荷的細胞轉染試劑在選定緩沖液中混合反應，形成陽離子多聚體DNA復合物；以及

以所述陽離子多聚體DNA復合物轉染宿主細胞。

與現有技術相比，本發明的有益效果至少在于：