[發(fā)明專利]兩株新的大熊貓C反應(yīng)蛋白單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010184037.X
• 申請(qǐng)日: 2020-03-16
• 公開（公告）號(hào): CN111321121B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝軍金;蔡開來;張文平;侯蓉;張夢(mèng)詩;張志和;沈富軍;張亮;劉佳文;王涓;劉紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 成都大熊貓繁育研究基地
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 北京酷愛智慧知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11514
• 代理人: 王靜

本發(fā)明涉及兩株新的大熊貓C反應(yīng)蛋白(CRP)單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株及其應(yīng)用，具體涉及大熊貓重組CRP雜交瘤細(xì)胞株的篩選，從而獲得大熊貓CRP單克隆抗體，并應(yīng)用于分析大熊貓血液CRP濃度。本發(fā)明通過利用細(xì)胞融合技術(shù)，獲得了分泌抗大熊貓CRP單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株2株(保藏編號(hào)為CCTCC NO：C2019297和CCTCC NO：C2019298)，收集并純化細(xì)胞株培養(yǎng)上清，獲得高效價(jià)的大熊貓CRP單克隆抗體，然后通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)對(duì)大熊貓血清中CRP蛋白濃度進(jìn)行檢測(cè)，并建立了大熊貓血液CRP濃度檢測(cè)技術(shù)體系，作為大熊貓炎癥狀態(tài)判斷指標(biāo)之一。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及制備兩株大熊貓重組C反應(yīng)蛋白(CRP)雜交瘤細(xì)胞株，從而得到高效價(jià)大熊貓CRP單克隆抗體，并應(yīng)用于大熊貓血液CRP濃度測(cè)定。

背景技術(shù)

C-反應(yīng)蛋白(CRP)，在機(jī)體受到感染或組織損傷時(shí)血漿中一些急劇上升的蛋白質(zhì)，可作為炎癥的生物標(biāo)志物。人類CRP包括200多個(gè)氨基酸，其一級(jí)結(jié)構(gòu)包含5個(gè)相同的亞單位，亞單位間以非共價(jià)鍵相結(jié)合，每個(gè)亞單位在其表面都含有CRP配體結(jié)合位點(diǎn)，構(gòu)成一種環(huán)狀五聚體蛋白。CRP具有物種特異性，例如大熊貓CRP與人CRP的蛋白質(zhì)序列只有66.99％的相似性，與狗CRP只有70.27％。我們前期實(shí)驗(yàn)顯示，已開發(fā)的人和狗CRP檢測(cè)試劑盒均無法用于大熊貓CRP濃度檢測(cè)。因此需要開發(fā)大熊貓CRP單克隆抗體用于檢測(cè)大熊貓的炎癥狀態(tài)。

單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體，可通過骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合篩選雜交瘤細(xì)胞，并通過收集、純化雜交瘤細(xì)胞分泌液得到單克隆抗體。本發(fā)明通過篩選大熊貓CRP雜交瘤細(xì)胞，得到高效價(jià)的大熊貓CRP抗體，建立特異性的大熊貓CRP抗體ELISA檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種抗大熊貓CRP亞基單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株、抗大熊貓CRP亞基單克隆抗體及制備方法，解決現(xiàn)有技術(shù)中沒有特異的抗大熊貓CRP特異抗體的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：

第一方面，本發(fā)明提供了一種雜交瘤細(xì)胞株，為抗大熊貓CRP單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CRP_panda_1，保藏編號(hào)為CCTCC NO：C2019297。

本發(fā)明還提供了另一種雜交瘤細(xì)胞株，為抗大熊貓CRP單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CRP_panda_2，保藏編號(hào)為CCTCC NO：C2019298。

第二方面，本發(fā)明保護(hù)抗大熊貓CRP單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CRP_panda_1、抗大熊貓CRP單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CRP_panda_2在生產(chǎn)抗大熊貓CRP單克隆抗體中的應(yīng)用。

第三方面，本發(fā)明提供了一種抗大熊貓CRP單克隆抗體，是由抗大熊貓CRP單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CRP_panda_1和/或抗大熊貓CRP單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CRP_panda_2產(chǎn)生。

優(yōu)選地，上述抗大熊貓CRP單克隆抗體的亞型為IgG1。

第四方面，本發(fā)明還保護(hù)上述抗大熊貓CRP單克隆抗體在western blot技術(shù)、ELISA技術(shù)中的應(yīng)用。

第五方面，本發(fā)明還提供了一種抗大熊貓CRP單克隆抗體的制備方法，包括步驟：培養(yǎng)抗大熊貓CRP單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CRP_panda_1和/或抗大熊貓CRP單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株CRP_panda_2，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，純化并濃縮得到抗大熊貓CRP單克隆抗體。