[發(fā)明專利]一種基于LC-MS同時測定多種神經(jīng)遞質(zhì)的人血清測定方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010183512.1
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111337609B
• 公開（公告）日: 2023-03-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 代小菲;楊超
• 申請（專利權(quán)）人: 上海中科新生命生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 肖平安

1.一種基于LC-MS同時測定多種神經(jīng)遞質(zhì)的人血清測定方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟S1樣本處理，將待測血清樣本加入含甲酸的乙腈溶液中，待測血清樣本與含甲酸的乙腈溶液體積比例為血清樣本：含甲酸的乙腈溶液＝1：4，甲酸含量為1％，再進行冰浴超聲波處理，所述的冰浴超聲波處理中的超聲波功率為180W，處理時間為20-40min，低溫孵育，低溫高速離心，取上清液體進行冷凍干燥，再加入含甲酸的乙腈-水溶液復(fù)溶，再次低溫高速離心，取上清液上機備用；

步驟S2色譜分離，取步驟S1獲得的上清液進行色譜分離，A相為含25mM甲酸銨的0.1％甲酸水溶液，B相為含0.1％甲酸的乙腈溶液，液相梯度如下，0-1min，B相維持在95％；1-14min，B相從95％線性變化至65％；14-16min，B相從65％線性變化至40％；16-18min，B相維持在40％；18-18.1min，B相從40％線性變化至95％；18.1-23min，B相維持在95％；

步驟S3質(zhì)譜分析，步驟S2分離后的樣品進行正離子掃描模式的質(zhì)譜分析，離子源的條件如下，離子源溫度：450℃，輔助氣壓1：60，輔助氣壓2：60，氣簾氣壓：30，離子噴霧電壓：5000V；

質(zhì)譜分析的各離子對及其對應(yīng)的去簇電壓、碰撞電壓和碰撞池出口電壓參數(shù)如下：

所述的步驟S3中的質(zhì)譜分析采用多反應(yīng)監(jiān)測模式檢測待測離子對。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于LC-MS同時測定多種神經(jīng)遞質(zhì)的人血清測定方法，其特征在于，所述含甲酸的乙腈-水溶液中含有1％的甲酸，其中乙腈與水的體積比例＝4：1。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于LC-MS同時測定多種神經(jīng)遞質(zhì)的人血清測定方法，其特征在于，所述的低溫孵育是-20℃孵育1h；所述的低溫高速離心是使用14000rcf 4℃離心20min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于LC-MS同時測定多種神經(jīng)遞質(zhì)的人血清測定方法，其特征在于，所述的步驟S2中的色譜分離的色譜柱溫度為35℃，流速為300μL/min。