[發(fā)明專利]一種大鯢虹彩病毒弱毒株及其應用

在審

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• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111394318A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設計）人: 周勇;薛明洋;范玉頂;劉文枝;孟彥;江南;李逸群;曾令兵
• 申請（專利權）人: 中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發(fā)明屬于疫苗制備技術領域，具體提供了一種大鯢虹彩病毒弱毒株及其應用，本發(fā)明所述的大鯢虹彩病毒為大鯢虹彩病毒HN2019株，保藏編號：CCTCC NO：V201979。利用該菌株制備的疫苗可以預防由大鯢虹彩病毒引起的疾病，免疫保護效果達到96%以上，不會對機體產(chǎn)生應激反應，可應用于大鯢虹彩病毒病的預防，降低大鯢養(yǎng)殖池塘大鯢虹彩病毒病的發(fā)病率，提高大鯢的存活率。

技術領域

本發(fā)明屬于疫苗制備技術領域，具體為一種大鯢虹彩病毒弱毒株及其應用。

背景技術

中國大鯢(Andrias davidianus)，俗稱“娃娃魚”，在分類學上屬于鯢亞目(Cryptobranchoides)隱鰓鯢科(Cryptobranchidae)大鯢屬(Andrias)，是現(xiàn)存?zhèn)€體最大的有尾兩棲動物，是我國珍稀的名貴特產(chǎn)，具有很高的科研及經(jīng)濟價值。主要分布于長江、黃河及珠江中上游支流的山溪河流中，尤以四川、湖北、湖南、河南、貴州、陜西等省居多。自1978年報道首例大鯢人工繁育成功以來，我國許多有大鯢自然分布的地區(qū)陸續(xù)開展了大鯢人工繁育與養(yǎng)殖技術的研究，促使大鯢人工養(yǎng)殖業(yè)迅速發(fā)展，已經(jīng)形成具有重大經(jīng)濟價值的產(chǎn)業(yè)。然而隨著大鯢養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴大與集約化程度的不斷提高，大鯢病害問題日益突出。近年來，由大鯢虹彩病毒引起的大鯢病毒性出血病在我國各大鯢主養(yǎng)區(qū)暴發(fā)與流行，死亡率高達90％以上，給大鯢養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。

對大鯢進行疫苗免疫可以有效預防大鯢虹彩病毒病的發(fā)生和流行。與其他種類疫苗相比，細胞培養(yǎng)活疫苗有如下優(yōu)點：①接種次數(shù)及用量較少。細胞培養(yǎng)活疫苗只需接種1次；②免疫效果好。接種活疫苗后，在動物體內(nèi)停留一個時期，可增殖產(chǎn)生大量抗原，從而產(chǎn)生良好的免疫應答效果，而機體所獲得的免疫力較強而持久，不僅可以產(chǎn)生全身免疫，而且可以產(chǎn)生局部免疫。因此，大鯢虹彩病毒病活疫苗無疑是一種優(yōu)選的預防大鯢虹彩病毒病發(fā)生的產(chǎn)品。

本發(fā)明提供中所描述的大鯢虹彩病毒是從湖南某蛙場棘胸蛙中分離的自然弱毒株，對大鯢不存在毒力，但能刺激大鯢產(chǎn)生抗大鯢虹彩病毒抗體，即安全，又有效。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供了一種大鯢虹彩病毒弱毒株，所述弱毒株的保藏編號為：CCTCC NO：V201979。

本發(fā)明的另一個目的在于提供了一種大鯢虹彩病毒HN2019株的應用，該毒株為大鯢虹彩病毒的自然弱毒株，利用該毒株可用于制備大鯢虹彩病毒病活疫苗，制得的疫苗無致病性、免疫原性好、刺激抗體迅速。

為了實現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術方案：

大鯢虹彩病毒HN2019(GSIV-HN2019)株的分離、篩選和鑒定：

本發(fā)明提供的弱毒株是申請人于2018年6月從湖南某蛙場棘胸蛙腎組織分離，經(jīng)各項鑒定證明為大鯢虹彩病毒，所述毒株已于2019年10月30日送至中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，分類命名：大鯢虹彩病毒GSIV-HN2019株，保藏編號：CCTCC NO：V201979，地址：中國武漢武漢大學。

大鯢虹彩病毒GSIV-HN2019株(本發(fā)明或稱為HN2019株)連續(xù)10代接種鯉魚上皮瘤細胞系(EPC細胞)，每代連續(xù)觀察14d，細胞未出現(xiàn)典型病變效應。接毒后第15d，收獲細胞培養(yǎng)物，提取病毒DNA，用數(shù)字PCR儀確定病毒濃度，病毒濃度≥1×10⁶copies/ml。

將大鯢虹彩病毒(HN2019株)連續(xù)10代，其中取6-10代病毒分別接種大鯢，連續(xù)觀察14d。結果顯示，6-10代病毒接種大鯢后，大鯢行為、食欲等生理指標均正常，未表現(xiàn)出任何臨床癥狀，剖檢觀察接種大鯢內(nèi)臟無病變，說明大鯢虹彩病毒HN2019株無毒力返強現(xiàn)象，可用于疫苗研究。

因此，本發(fā)明還提出了所述的大鯢虹彩病毒HN2019株在制備疫苗中的應用，其中，所述的疫苗為由大鯢虹彩病毒感染引起的疾病的疫苗，例如大鯢虹彩病毒病疫苗，其特征在于其有效成分包括本發(fā)明所述的大鯢虹彩病毒HN2019株。