[發明專利]大豆分枝數分子標記及其應用

在審

• 申請號: 202010182107.8
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111334602A
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發明（設計）人: 邱麗娟;吳海濤
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開了一種大豆分子標記及獲得分子標記的方法與應用，采用圖位克隆的方式獲得分子標記，以特定的引物對對基因組DNA擴增，并將獲得的分子標記應用于大豆分枝數的鑒定中。利用圖位克隆的方法，對多分枝數大豆基因組中多分枝決定性堿基序列進行定位，并進行克隆，根據克隆結果，確定大豆是否為多分枝數大豆，進而對其進行種植，以提高大豆的產量。

技術領域

本發明涉及生物技術及基因工程技術領域，更具體地說是涉及大豆多態性分子標記及其在鑒定大豆分支數中的應用

背景技術

大豆(Glycinemax(L.))是我國主要的糧食作物，既是優質蛋白的主要來源，也是重要的糧油兼用作物。我國常年大豆種植面積9000萬畝左右，總產量1200萬噸(平均單產12加公斤/畝)；隨著人民生活水平的提高和養殖業的快速發展，我國大豆遠不能滿足需求，自給率每年下降3.6％。因此，進口量不斷增加，2017年進口量9553萬噸，對進口大豆的依存度85％以上。進口大豆按當前全國大豆畝產計算，需要增加近8億畝耕地。而造成我國大豆供求緊張的主要原因是單產水平低，因此提高大豆單產一直以來都是大豆育種的重要目標。

分枝數是構成大豆產量的重要因子，與大豆產量的提高密切相關，其不僅影響結莢數還影響群體通風透光狀況進而影響植株對光能的利用。此外，大豆分枝發育對出苗不齊起到巨大的補償作用，有效地補充了群體的產量。

然而，由于大豆基因組十分復雜，存在大量重復序列；分枝數又是由多基因控制的數量性狀，遺傳結構復雜，使得大豆分枝性狀的研究尚處于起步階段，未有圖位克隆新基因的報道。探索大豆分枝發生的遺傳機制、定位并克隆分枝相關基因，進而研究大豆中分枝相關基因調控途徑，可為培育具有理想株型的高產品種奠定重要理論基礎。

因此，如何利用圖位克隆的方法提供一種大豆分子標記并對大豆進行分枝數的鑒定是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明利用圖位克隆的方法，對多分枝數大豆基因組中多分枝決定性堿基序列進行定位，并進行克隆，根據克隆結果，確定大豆是否為多分枝數大豆，進而對其進行種植，以提高大豆的產量。

一種大豆分子標記，其特征在于，所述大豆分子標記包括：以大豆基因組DNA為模板、采用引物對BR69進行擴增得到的DNA分子；和，以大豆基因組DNA為模板、采用引物對BR77進行擴增得到的DNA分子。

所述BR69引物對包括：

BR69-F：5’-AGTTGACAGGAACTAAAGT-3’，如SEQ ID NO.1所示；

BR69-R：5’-GATAATTCAAGTAAATAGCGA-3’，如SEQ ID NO.2所示；

所述BR77引物對包括：

BR77-F:5’-TCTCTTTGTGTATGTCTTCTCC-3’，如SEQ ID NO.3所示；

BR77-R：5’-TTGTTGCATCCAAATGAGAG-3’，如SEQ ID NO.4所示。

分子標記，即大豆基因組中的一段堿基序列，以該段堿基序列作為大豆基因組的分子標記，并以可以特異擴增出分子標記的引物對BR69和BR77對大豆基因組進行擴增，若能擴增出目的片段，則說明待測大豆可作為多分枝數的大豆種子進行種植；為鑒別大豆分枝數的性狀提供了基礎，且，兩組引物對的靈敏度和特異性優良，防止了假陽性的出現。

作為本發明優選的技術方案，其中，所述DNA分子a中，KF19的大豆分子標記序列為：