[發明專利]一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010181437.5
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111321198B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 方朝君;鄭江萍;丁佳;金立方
• 申請（專利權）人: 浙江達美生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/26
• 分類號: C12Q1/26
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 張黎

本發明提供了一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒及其制備方法和應用，涉及生化試劑測定技術領域，該試劑盒包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1包括：磷酸緩沖液、抗壞血酸氧化酶、丙酮酸氧化酶、亞鐵氰化鉀、氧化型谷胱甘肽、MgCl₂、FAD、防腐劑和表面活性劑；所述試劑R2包括甘氨酸緩沖液、NADPH、防腐劑和保護劑。通過在試劑中加入EGTA以及二硫蘇糖醇能夠擴大試劑盒的線性范圍、提高試劑盒的穩定性。此外，本發明還提供了上述試劑盒的制備方法和應用，該試劑盒能夠對谷胱甘肽還原酶進行準確測定。

技術領域

本發明涉及生化試劑測定技術領域，具體涉及一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒及其制備方法和應用。

背景技術

谷胱甘肽還原酶(GR)是一種利用還原型NAD將氧化型谷胱甘肽(GS-SG)催化反應成還原型(GSH)的酶，具有極其重要的生理功能，廣泛的存在于血清、紅細胞、單核巨噬細胞、心、肝、腎等組織細胞內，各類肝臟疾病、尿毒癥患者全血中GR活性會顯著升高，同時組織中的GR會顯著降低，檢測樣品中GR活性可用于輔助判斷肝臟與多種疾病。對于肝臟疾病而言，在急性肝炎的早期，血清中谷胱甘肽還原酶的出現比轉氨酶更早，和目前急性肝炎的其他檢查項目結果進行綜合評估可以輔助判斷病人的發病時間和發病階段。同時，谷胱甘肽還原酶的測定還可以輔助鑒別黃疸類型，谷胱甘肽還原酶的檢測在診斷黃疸成因時也能與區別是肝前性、肝源性、肝后性黃疸，非肝源性黃疸谷胱甘肽還原酶活性處于正常水平，綜合其他檢查項目結果進行評估可以輔助判斷病人的病因病情。

目前，國內測定谷胱甘肽還原酶的方法主要有Elisa法和紫外酶法，前者需要手工操作，耗時較長、步驟比較繁瑣且價格不菲，而后者為目前國內主要推廣的方法，但現有的紫外酶法谷胱甘肽還原酶的試劑盒主要為進口干粉試劑，雖然結果準確，但是價格不菲，使用前需用緩沖液和蒸餾水溶解，溶解后的試劑液只能在2～8℃環境下保存兩天，使用非常不方便并且復溶后使用不完會出現大量的浪費。而臨床生化分析儀上最方便使用的國產液體雙試劑目前存在穩定性差，抗干擾能力差等缺點。

中國專利CN108828215B公開了一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒及其制備方法和應用，該試劑盒含有試劑R1和試劑R2；試劑R1中含有以下成分：Tris緩沖液50-200mmol/L、EDTA 0.5-2mmol/L、丙酮酸羧化酶1-5KU/L、抗壞血酸氧化酶1-5KU/L、亞鐵氰化鉀5-20mg/L、表面活性劑、防腐劑；試劑R2中含有以下成分：Tris緩沖液50-200mmol/L、EDTA 0.5-2mmol/L、GSSG 2-10mmol/L、NADPH 0.1-0.5mmol/L、穩定劑1-15g/L、防腐劑0.5-2g/L。該試劑盒具有穩定性強以及抗干擾能力強的特點，與此同時，該發明還提供了上述試劑盒的制備方法和應用。但該試劑盒線性范圍較小，同時穩定性也相對較弱。

中國專利CN110734952A公開了一種谷胱甘肽還原酶檢測試劑盒及應用，包括以下組分：第一試劑，包括磷酸鹽緩沖液、EDTA-NA2、抗壞血酸氧化酶、高鐵氰化鉀、防腐劑和氧化型谷胱甘肽；第二試劑，包括三羥甲基胺基甲烷緩沖液、EGTA、防腐劑和還原型輔酶。同時，該發明還公開了上述試劑盒的應用。但該試劑盒穩定性相對較差，抗干擾能力不強。

針對現有的谷胱甘肽還原酶測定試劑盒存在的穩定性差，線性范圍小以及抗干擾能力不強等問題，應尋找一種穩定性好、線性范圍廣、抗干擾能力強的試劑盒，使得該試劑盒能夠實現谷胱甘肽還原酶的測定。

發明內容

本發明針對現有技術存在的問題，提供了一種谷胱甘肽還原酶測定試劑盒及其制備方法和應用，該試劑盒穩定性好、線性范圍廣、抗干擾能力強，能夠實現谷胱甘肽還原酶的準確測定。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：