[發(fā)明專利]胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010180189.2
• 申請(qǐng)日: 2020-03-16
• 公開（公告）號(hào): CN111398598A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫天旭;李婷;高威;孫成艷;何浩會(huì)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 迪瑞醫(yī)療科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 長(zhǎng)春眾邦菁華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 22214
• 代理人: 劉微

1.一種胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括：R1試劑：包被鏈霉親和素的磁珠溶液；R2試劑：吖啶酯標(biāo)記的IGFBP-3抗體溶液；R3試劑：生物素標(biāo)記的IGFBP-3抗體溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的R1試劑中，磁珠為粒徑大小1.5-3μm的Fe3O4納米粒子，包被鏈霉親和素的磁珠濃度為0.05％-0.15％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的R2試劑，pH為5.0-8.0，吖啶酯標(biāo)記的IGFBP-3濃度為0.3μg/mL-1.5μg/mL，抗體與吖啶酯按摩爾體積比為1:2.5-1:15。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的吖啶酯采用DMAE類吖啶酯或酰胺類吖啶酯。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，DMAE類吖啶酯采用DMAE-NHS、NSP-DMAE-NHS或NSP-DMAE-HEG-Glu-NHS。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，酰胺類吖啶酯采用NSP-SA-NHS。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的R3試劑，pH為5.0-8.0，生物素標(biāo)記的IGFBP-3抗體濃度為0.4μg/mL-2.5μg/mL，抗體與生物素按摩爾體積比為1:3.5-1:20。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，其特征在于，還包括以緩沖液為基質(zhì)的IGFBP-3蛋白配制校準(zhǔn)品及質(zhì)控品。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

R1試劑的制備：使用100-400mM Tris-HCl緩沖液配制包被鏈霉親和素的磁珠濃度為0.05％-0.15％；

R2試劑的制備：使用30KDa孔徑超濾離心管將IGFBP-3抗體緩沖液置換為100mM-200mMPB緩沖液，將抗體與吖啶酯按摩爾體積比1:2.5-1:15混合，充分混勻，室溫放置1-3h后，AKTA蛋白純化儀純化標(biāo)記抗體，將收集到的吖啶酯標(biāo)記抗體選用pH5.0-8.0的100-400mMTris-HCl緩沖液稀釋至0.3μg/mL-1.5μg/mL；

R3試劑的制備：使用30KDa孔徑超濾離心管將IGFBP-3抗體緩沖液置換為100mM-200mMPB緩沖液，將抗體與生物素按摩爾體積比1:3.5-1:20混合，充分混勻，室溫放置2-4小時(shí)后，AKTA蛋白純化儀純化標(biāo)記抗體，將收集到的生物素標(biāo)記抗體選用pH5.0-8.0、100-400mMTris-HCl緩沖液稀釋至0.4μg/mL-2.5μg/mL。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-3化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒的制備方法，其特征在于，還包括制備校準(zhǔn)品及質(zhì)控品的步驟，校準(zhǔn)品的制備步驟為：用含有0.5-1.0％BSA、2-3％海藻糖、0.1-0.5％PEG6000、0.05-0.1％吐溫-20及0.1-0.5％的酪蛋白酸鈉、pH7.0-8.0的100-400mM MES緩沖液并添加0.1％疊氮鈉防腐劑，將IGFBP-3蛋白稀釋成校準(zhǔn)品，分裝成0μg/mL、0.75μg/mL、1.25μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL；質(zhì)控品的制備步驟為：用含有0.5-1.0％BSA、0.1-0.5％PEG6000、0.05-0.1％吐溫-20及0.1-0.5％的酪蛋白酸鈉，pH7.0-8.0的100-400mM MES緩沖液將IGFBP-3蛋白配制成濃度為1μg/mL和8μg/mL的質(zhì)控品。