[發明專利]抗HPV16E7蛋白單抗69E2、雜交瘤細胞株及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010180043.8
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN111410689B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 胡仁建;蔡家利
• 申請（專利權）人: 重慶理工大學
• 主分類號: C07K16/08
• 分類號: C07K16/08;C12N15/13;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 重慶航圖知識產權代理事務所(普通合伙) 50247
• 代理人: 王貴君

本發明公開了抗HPV16E7蛋白單抗69E2、雜交瘤細胞株及其制備方法和應用，該雜交瘤細胞保存于中國典型培養物保藏中心，保藏號為：CCTCC NO：C2019181，該雜交瘤細胞能夠分泌效價高的單克隆抗體，獲得抗體能夠與HPV16陽性的細胞株CaSki和HPV16陽性宮頸癌鱗癌石蠟組織切片反應，具有很好的特異性；可以作為ELISA試劑盒、免疫化學試劑盒、免疫熒光試劑盒、化學發光免疫分析檢測試劑盒等的檢測試劑。

技術領域

本發明涉及免疫學領域，具體涉及分泌抗HPV16E7蛋白單抗69E2的雜交瘤細胞，還涉及由該細胞分泌的單克隆抗體及其制備方法和應用。

背景技術

宮頸癌是全球婦女癌癥中居第四位的癌癥，每年新增530，000病例和死亡275，000例，這些病例中大約85％來源于發展中國家。在中國，宮頸癌發病率居女性生殖道惡性腫瘤的首位。宮頸的高危型人乳頭瘤病毒(High risk human papillomavirus，HR-HPV)的持續性感染是導致宮頸上皮內瘤變(CIN)和宮頸癌的直接病因，其中HPV16型最高，占53％。HPVE7蛋白是HPV致癌的關鍵分子，E7致癌蛋白選擇性表達在腫瘤細胞中，不在正常細胞中表達，隨著宮頸上皮內瘤CIN從低級別向高級別(從CIN1經歷CIN2、CIN3到侵蝕性宮頸癌)進展，E7致癌蛋白的表達向外層推進越明顯且表達量越來越高，最終致癌蛋白E7蛋白出現在宮頸脫落細胞中。HR-HPVDNA檢測聯合細胞學檢查(如TCT)，可以增加宮頸上皮內瘤變CIN3的檢出率并減少宮頸癌的發生，共同檢測方法也可增加宮頸原位腺癌和浸潤性宮頸腺癌的檢出率。對30～65歲女性進行細胞學和HPVDNA共同檢測，不可避免會出現少部分細胞學檢查結果陰性但HR-HPVDNA檢測陽性者。美國最新的宮頸癌篩查指南提供了2種方案：(1)在12個月時重復細胞學和HR—HPVDNA共同檢測。如果重復共同檢測時HPV陽性或細胞學檢查結果為LSIL或更嚴重者，則應行陰道鏡檢查；(2)立即行HPV基因分型檢測(HPVl6或HPVl8)。新的篩查指南對HR—HPVDNA檢測結果陽性者缺乏肯定、一致的處理方案，而且陰道鏡檢查是有創傷的檢查，也增加患者心理負擔和經濟負擔，主要因為對于細胞學陰性而HR-HPV的DNA檢測陽性患者不能預測哪些患者最終發展為宮頸內瘤變CIN1、CIN2、CIN3和宮頸浸潤癌，如果針對那些細胞學檢查結果陰性但HR-HPV的DNA檢測陽性的婦女，補充檢測HR-HPV的E7致癌蛋白比如HPV16E7、HPV18E7致癌蛋白等，很可能在宮頸上皮內瘤CIN2、CIN3時期甚至CIN1時期就發現有癌細胞的存在，最終達到早期預警、早期診斷和早期治療宮頸癌的目的。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種抗HPV16E7蛋白單抗69E2；本發明的目的之二在于提供分泌抗HPV16E7蛋白單抗69E2的雜交瘤細胞；本發明的目的之三在于提供所述抗HPV16E7蛋白單抗69E2的制備方法；本發明的目的之四在于提供所述抗HPV16E7蛋白單抗69E2制備檢測HPV16E7蛋白的試劑盒中的應用；本發明的目的之五在于提供含有所述抗HPV16E7蛋白單抗69E2的試劑盒。

為達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

1、抗HPV16E7蛋白單抗69E2，所述單抗69E2包括重鏈和輕鏈，所述重鏈的可變區CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列分別如SEQ ID NO.6的第50-54位、第69～85位、第118-127位所示；所述輕鏈的可變區CDR1、CDR2、CDR3氨基酸序列如SEQ ID NO.8的第46-55位、第71-77位和第110-118位所示。

優選的，所述重鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；所述輕鏈的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。

優選的，所述重鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示；所述輕鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。

優選的，所述單抗由雜交瘤細胞株HPV16E7-69E2分泌，保藏號為CCTCC NO：C2019181。