[發明專利]一種基于疏水界面的體外無細胞蛋白合成方法、D2P試劑盒及相關應用

在審

• 申請號: 202010179689.4
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN113403360A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 郭敏;李海洋;于雪
• 申請（專利權）人: 康碼（上海）生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種外源蛋白的體外無細胞合成方法，其特征在于：所述外源蛋白的體外無細胞合成方法包括：

步驟一、將組分ii加入到組分i中，進行混合；

其中，組分i為體外無細胞蛋白合成體系；所述體外無細胞蛋白合成體系為水相的合成體系；

其中，組分ii為編碼外源蛋白的核酸模板；

組分i和組分ii共同提供合成所述外源蛋白所需的翻譯相關元件；

步驟二、在疏水界面iii輔助下，進行孵育反應，合成所述外源蛋白；

其中，所述疏水界面iii與水相的體外無細胞蛋白合成體系進行面接觸；

還可選地包括步驟三：分離或/和檢測所述外源蛋白。

2.根據權利要求1所述外源蛋白的體外無細胞合成方法，其特征在于：所述疏水界面iii是由疏水相與所述水相的合成體系進行面接觸形成的界面；

優選地，根據與所述水相的合成體系進行面接觸的疏水相的物理狀態，所述疏水界面iii選自：固相疏水界面、液相疏水界面、或者其組合；

優選地，所述疏水界面iii由下述疏水表面提供：反應器內表面、疏水內置固體物的疏水外表面、油相體系的液態界面、或者其組合；

優選地，所述疏水相由烴物質提供，所述烴物質為膏狀、蠟狀、顆粒、粉末、液態、或者其混合形態；

優選地，所述烴物質中含有的烴為直鏈結構、支鏈結構、環狀結構、或者其組合；

優選地，所述烴物質的碳原子數至少為6，更優選地，所述烴物質的碳原子數為6～44；

優選地，所述烴物質選自脂肪烴；

優選地，所述烴物質選自烷烴；

優選地，所述烴物質選自凡士林、礦物油、或者其組合；

優選地，所述烷烴的碳原子數為6～44；

更優選地，所述烷烴選自：環己烷、異辛烷、癸烷、十四烷、十五烷基環己烷、四十四烷、凡士林、或者其組合；

將能夠提高外源蛋白合成量的烷烴用量記為Q_hc；

所述Q_hc選自Y_PRT(C_hc)曲線中Y_PRT大于Y₀時的烷烴用量區間；其中，C_hc指烷烴用量，Y_PRT指外源蛋白表達量，Y_PRT(C_hc)曲線指以烷烴用量為自變量、外源蛋白表達為因變量、其它反應參數確定時的曲線；Y₀指所述C_hc為0時對應的外源蛋白表達量；

優選地，所述Q_hc選自外源蛋白表達量至少為Y₀+50％Y_Δ時的烷烴用量區間；

更優選地，所述Q_hc選自外源蛋白表達量至少為Y₀+60％Y_Δ時的烷烴用量區間；

更優選地，所述Q_hc選自外源蛋白表達量至少為Y₀+70％Y_Δ時的烷烴用量區間；

更優選地，所述Q_hc選自外源蛋白表達量至少為Y₀+80％Y_Δ時的烷烴用量區間；

更優選地，所述Q_hc選自外源蛋白表達量至少為Y₀+90％Y_Δ時的烷烴用量區間；

更優選地，所述Q_hc選自外源蛋白表達量至少為Y₀+95％Y_Δ時的烷烴用量區間；

更優選地，所述Q_hc為外源蛋白最高表達量時的烷烴用量C_max；

其中，所述Y_Δ＝Y_max-Y₀；其中，所述Y_max指Y_PRT(C_hc)曲線中外源蛋白的最高表達量。

3.根據權利要求1-2中任一項所述外源蛋白的體外無細胞合成方法，其特征在于，所述體外無細胞蛋白合成體系包括細胞提取物；

優選地，所述細胞提取物包括識別核酸模板上的啟動子的內源性表達的RNA聚合酶，所述核酸模板上的啟動子啟動外源蛋白的基因轉錄過程。