[發明專利]一種野生阿魏菇菌種分離及其純化方法

在審

• 申請號: 202010179518.1
• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號: CN111304097A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 木古麗·木哈西
• 申請（專利權）人: 伊犁師范大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N1/02;C12N3/00;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種野生阿魏菇菌種分離及其純化方法，其特征在于：具體包括以下步驟：

步驟一、野生種菇的挑選及消毒處理：種菇的主要標準是從不同地域、不同生長環境中采集多株菇型圓整、光滑直立、顏色潔白、柄粗蓋厚、無病蟲害、生長快而健壯的單生野生阿魏菇子實體備用；將采集的野生阿魏菇子實體在超凈工作臺無菌條件下，進行表面消毒，具體步驟是無菌水沖洗3次，升汞處理5分鐘，然后8％次氯酸鈉溶液消毒5分鐘，再無菌水沖洗3次，75％酒精浸泡5分鐘，再無菌水沖洗3次；

步驟二、制備分離純化培養基：各原料及其用量為：純凈水1000毫升，新鮮去皮馬鈴薯200g，小麥40g，葡萄糖20g，瓊脂粉20g，KH₂PO₄3g，MgSO₄1.5g，蛋白胨10g；

步驟三、菌種分離方法：

(1)組織分離：在超凈工作臺上使用鑷子在多株野生阿魏菇內部分別取出一塊菌肉，然后將菌肉分別置于含鏈霉素的分離純化培養基中央，將接種過的培養皿及試管置于不同的溫度梯度(18℃，20℃，25℃)進行暗培養，每天觀察并記錄菌絲生長情況，定期統計菌絲培養特征，根據菌絲萌發及生長情況，確定最佳培養溫度、相對濕度和培養時間；

(2)孢子分離：在超凈工作臺內取消毒好的菌蓋，用經火焰滅菌的接種環，沾上無菌水后，準確地直插在兩片菌褶之間(切勿使接種環接觸到裸露于空氣間的菌褶部分，以免粘上雜菌)，輕輕地抹取，將尚未彈射的孢子沾在接種環上，取出接種環，在準備好的斜面培養基上或平板培養基上劃線接種，加棉花塞或蓋上平皿，將接種過的試管和培養皿置于不同的溫度梯度(18℃，20℃，25℃)進行暗培養，每天觀察并記錄菌絲生長情況，定期統計菌絲培養特征，根據菌絲萌發及生長情況，確定最佳培養溫度、相對濕度和培養時間；

步驟四、菌絲培養及純化：在無菌條件下，將萌發的阿魏菇菌絲轉接到新的培養基試管斜面及培養皿中，置于提前消毒處理過的培養箱內培養，溫度保持20℃，相對濕度保持30-40％，培養3-5天；經恒溫培養萌發后挑選幾株發育勻稱、生長快速的菌落，移接于另一試管斜面培養基上，如此重復操作三次，即可完成純化，獲得的阿魏菇純菌絲體，即阿魏菇新菌種。

2.根據權利要求1所述的一種野生阿魏菇菌種分離及其純化方法，其特征在于：所述步驟一中，對子實體的重量、肉質肥厚度、菌蓋大小和柄長的數據進行記錄，篩選出重量大、肉質肥厚度高、菌蓋大和柄較長的子實體。

3.根據權利要求1所述的一種野生阿魏菇菌種分離及其純化方法，其特征在于：所述步驟二中的特殊分離純化培養基的配制方法為：各藥品按實際用量計算后，按培養基配方逐一稱??；將去皮馬鈴薯切成小塊與小麥煮水過濾；把濾液放入鍋中，依次加入葡萄糖、KH₂PO₄、MgSO₄、蛋白胨，最后再加入瓊脂粉，加熱溶解；待瓊脂完全溶解后再補水至所需量；按實驗要求，將配制的培養基分裝試管，封口；115℃滅菌30min后傾注斜面及培養皿備用。

4.根據權利要求1所述的一種野生阿魏菇菌種分離及其純化方法，其特征在于：所述步驟三中，使用滅菌后的鑷子在菌蓋和菌柄交界出子實體內部取出菌肉，且菌肉呈黃豆粒大小。

5.根據權利要求1所述的一種野生阿魏菇菌種分離及其純化方法，其特征在于：所述步驟三中，阿魏菇菌種孢子分離方法，采用菌褶涂抹法。

6.根據權利要求1所述的一種野生阿魏菇菌種分離及其純化方法，其特征在于：所述步驟四中，根據菌絲萌發及生長情況，確定的野生阿魏菇菌種的最佳培養溫度為20℃，相對濕度30-40％，培養時間為3-5天。