[發(fā)明專利]一種高效收集新鮮采摘茶葉表面微生物的方法

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• 申請日: 2020-03-14
• 公開（公告）號: CN111334433A
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 向盈盈;李曉霞;合浩;皮婷;盧春霞;宋飛
• 申請（專利權(quán)）人: 昆明市延安醫(yī)院
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/20
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

本發(fā)明公開了一種高效收集新鮮采摘茶葉表面微生物的方法，利用含有親水基表面活性劑SDS的緩沖液提取茶葉表面的微生物，通過1‰?5‰體積的10％SDS改良緩沖液，然后通過離心、超聲振蕩、生理鹽水重懸菌體等方法收集茶葉表面微生物，結(jié)果顯示在加入SDS后所收集的細菌總數(shù)相比于所有已報道的方法顯著增加。本發(fā)明工藝簡單、成本低，微生物提取效率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于茶葉種植及微生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種高效收集新鮮采摘茶葉表面微生物的方法。

背景技術(shù)

茶葉，指茶樹的葉子和芽，別名茶、槚(jiǎ)、茗、荈(chuǎn)。茶葉具有健身、治疾之藥物療效，又富欣賞情趣，可陶冶情操。微生物是地球表面生物圈的重要成員，它們廣泛分布在自然界，對自然界的物質(zhì)轉(zhuǎn)化和生物循環(huán)有重要的意義和作用。近年來微生物在茶葉生長繁殖、病蟲害防治、肥培管理、加工貯藏以及保健品開發(fā)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。現(xiàn)有收集茶葉表面微生物的方法主要是利用生理鹽水對茶葉進行浸泡，再對收集液進行離心、超聲振蕩從而對茶葉表面微生物進行收集。該傳統(tǒng)收集方法雖然簡便，但收集效率很低，并且收集的茶葉表面微生物很不完全，因此需要探索一種高效的茶葉表面微生物收集方法。

SDS屬于親水基表面活性劑，且易溶于生理鹽水，在工業(yè)上常用作洗滌劑，與陰離子、非離子復配性好，具有良好的乳化、發(fā)泡、滲透、去污和分散性能，在與茶葉表面微生物結(jié)合形成聚合物后懸浮于收集液中。因此，在收集液中加入SDS能有效提高茶葉表面微生物的收集效率，對茶葉表面微生物開展進一步的研究具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種高效收集新鮮采摘茶葉表面微生物的方法，工藝簡單、成本低，微生物提取效率高。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，一種高效收集新鮮采摘茶葉表面微生物的方法，按照如下步驟進行：

步驟1：將茶葉剪成面積為1cm²的碎片，放入無菌的0.85％氯化鈉溶液中，然后再加入1‰-5‰體積的10％SDS緩沖液，振蕩30min，再用紗布過濾以除去茶葉濾渣，隨后在11000g的條件下離心20min，棄上清保留沉淀；

步驟2：將步驟1沉淀加入0.85％氯化鈉溶液中，并使用超聲振蕩儀超聲振蕩20min以使沉淀混勻；

步驟3：將步驟2超聲振蕩后的物料，離心5min，重復離心兩次；

步驟4：取步驟3離心后的上清液均勻涂在LB固體培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)箱中過夜培養(yǎng)，并觀察所收集到細菌形成的菌落總數(shù)。

進一步的，步驟1中所述SDS緩沖液的加入量為1‰體積。

進一步的，步驟1中震蕩條件為15℃、150rpm/min。

進一步的，步驟2中超聲頻率為40KHz，超聲功率為90W。

進一步的，步驟4中培養(yǎng)箱溫度為37℃。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明采用在收集液中加入10％的SDS溶液，能夠使收集到的茶葉表面微生物比用傳統(tǒng)方法提高將近10倍，同時本發(fā)明收集方法工藝簡單、成本低。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明實施例采用不同體積配比的SDS改良緩沖液從茶葉表面收集微生物的結(jié)果對照圖；

圖2為本發(fā)明實施例采用1‰體積的10％SDS改良緩沖液從茶葉表面收集微生物的結(jié)果與常規(guī)方法從茶葉表面收集微生物的結(jié)果對照圖。

具體實施方式