[發明專利]種植體周圍抗炎用融合基因、外泌體、生物涂料以及制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010177103.0
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111500607B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發明（設計）人: 邢鶴琳;楊國棟
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京口腔醫院
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/86;C12N5/10;A61L27/54;A61L27/50;A61L27/34;A61L27/28
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 瞿曉晶

本發明涉及種植體周圍抗炎用融合基因、外泌體、生物涂料以及制備方法和應用，屬于種植體技術領域。本發明所述融合基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。基于本發明所述融合基因制備得到的外泌體負載于種植體上后，能夠提高種植體的生物相容性，具有顯著的抗炎作用。

技術領域

本發明涉及種植體技術領域，具體涉及種植體周圍抗炎用融合基因、外泌體、生物涂料以及制備方法和應用。

背景技術

種植體治療是目前臨床上骨缺損和牙缺失治療的常見手段。然而，種植體作為異物，常引起周圍炎癥，嚴重影響種植體的治療效果。如何增強種植體的組織相容性，減輕炎癥，至關重要。

發明內容

本發明的目的在于提供種植體周圍抗炎用融合基因、外泌體、生物涂料以及制備方法和應用。基于本發明所述融合基因制備得到的抗炎外泌體負載于種植體上后，能夠提高種植體的生物相容性，具有顯著的抗炎作用。

本發明提供了種植體周圍抗炎用融合基因，所述融合基因的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。

本發明還提供了基于上述技術方案所述融合基因的表達載體，所述表達載體含上述技術方案所述融合基因。

優選的是，所述表達載體的構建用骨架質粒包括pUC57載體或pWPI載體。

本發明還提供了一種抗炎外泌體，所述抗炎外泌體能夠表達上述技術方案所述融合基因。

本發明還提供了上述技術方案所述抗炎外泌體的構建方法，包括以下步驟：

a)將上述技術方案所述融合基因克隆至pUC57載體，得到pUC57-IL10；

b)將步驟a)所述pUC57-IL10和pWPI載體酶切，連接，得到pWPI-IL10；

c)將步驟b)得到的pWPI-IL10轉化入Stbl3大腸桿菌，提取pWPI-IL10；

d)將步驟c)得到的pWPI-IL10和psPAX2、pMD2G轉染包裝細胞HEK293細胞，得到過表達IL10的病毒載體；

e)將步驟d)得到的過表達IL10的病毒載體感染MSC細胞，培養、分離得到抗炎外泌體。

本發明還提供了一種基于上述技術方案所述抗炎外泌體的抗炎生物涂料，所述生物涂料包括PEI溶液、明膠溶液和抗炎外泌體溶液。

優選的是，所述PEI溶液中PEI的質量濃度為0.5～2mg/ml，所述PEI溶液的溶劑為0.15M的氯化鈉水溶液；所述明膠溶液中明膠的質量濃度為5mg/ml，所述明膠溶液的溶劑為含有0.15M氯化鈉的PBS水溶液；以蛋白質量濃度計，所述抗炎外泌體溶液中抗炎外泌體的質量濃度為100μg/ml，所述抗炎外泌體溶液的溶劑為殼聚糖溶液；所述殼聚糖溶液中殼聚糖的質量濃度為5mg/ml，所述殼聚糖溶液的溶劑為含0.15M氯化鈉的體積百分含量為1％的醋酸水溶液。

本發明還提供了基于上述技術方案所述生物涂料的種植體的改造方法，包括以下步驟：

1)將種植體進行酸蝕，得到酸蝕后的種植體；

2)將步驟1)酸蝕后的種植體在PEI溶液中浸泡20～30min，清洗，得到吸附PEI分子的種植體；

3)將步驟2)得到的吸附PEI分子的種植體在明膠溶液中浸泡10～15min，清洗，得到負載明膠的種植體；

4)將步驟3)得到的負載明膠的種植體在抗炎外泌體溶液中浸泡10～15min，清洗，得到負載抗炎外泌體的種植體；

5)重復步驟3)和步驟4)3～5次，得到改造后的種植體。

本發明還提供了一種基于上述技術方案所述改造方法制備得到的抗炎種植體。