[發明專利]一種對蝦耦合抗菌肽及基因、對蝦耦合抗菌肽的獲取方法、表達載體、重組菌和應用

有效

• 申請號: 202010176339.2
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111233993B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 黎銘;馬春霞;熊建華;梁湘;朱鵬;陳福艷;雷愛瑩
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區水產科學研究院
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;C12N15/81;C12N1/19;A61K38/17;A61P31/00;A23K20/147;A23K50/80;C12R1/84
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 朱玲艷

本發明提供了一種對蝦耦合抗菌肽及基因、對蝦耦合抗菌肽的獲取方法、表達載體、重組菌和應用，屬于基因工程技術領域，所述對蝦耦合抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述對蝦耦合抗菌肽代替目前水產飼料中使用的抗生素，以達到既可預防和治療動物疾病，又可減少濫用素帶來的不良后果的目的。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，尤其涉及一種對蝦耦合抗菌肽及基因、對蝦耦合抗菌肽的獲取方法、表達載體、重組菌和應用。

背景技術

魚、蝦等水產品是人類日常食品蛋白重要來源，因此水產養殖在全球經濟中具有相當重要的地位。然而，由于細菌或者病毒的侵害，每年水產養殖都遭受巨額經濟損失。為了預防和控制病害發生，養殖戶廣泛使用化學藥物進行場地消毒或者添加抗生素到飼料進行疾病防治。大量使用化學藥物或者抗生素類藥物對生態產生嚴重破壞作用，同時引起的食品安全問題令人堪憂。在國家加強環保和食品安全監管形勢下，開發無污染、無殘留、安全有效的，可全部或者部分取代化學藥物或者抗生素類藥物的新型漁藥具有重要的社會意義。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種對蝦耦合抗菌肽及基因、對蝦耦合抗菌肽的獲取方法、表達載體、重組菌和應用，本發明提供的對蝦耦合抗菌肽代替目前水產飼料中使用的抗生素，以達到既可預防和治療動物疾病，又可減少濫用素帶來的不良后果的目的。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種對蝦耦合抗菌肽，所述對蝦耦合抗菌肽的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示。

本發明還提供了編碼上述技術方案所述的對蝦耦合抗菌肽的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

本發明還提供了一種表達載體，將上述技術方案所述的基因連接到酵母表達載體pPIC9K的EcoR1位點和Not1位點之間，得到表達載體。

本發明還提供了一種重組菌，將上述技術方案所述的表達載體轉入Top10克隆菌株中，提取質粒，將所述質粒電轉化到畢赤酵母中，得到重組菌。

優選的，所述畢赤酵母包括畢赤酵母GS115。

本發明還提供了一種上述技術方案所述的對蝦耦合抗菌肽的獲取方法，將上述技術方案所述的重組菌進行液體培養，將得到的培養液離心，得到上清液，純化所述上清液中對蝦耦合抗菌肽，對蝦耦合抗菌肽。

本發明還提供了上述技術方案所述的重組菌在制備水生動物抗菌藥物、疫苗或飼料添加劑中的應用。

優選的，所述水生動物包括魚或蝦。

本發明提供了一種對蝦耦合抗菌肽及基因、對蝦耦合抗菌肽的獲取方法、表達載體、重組菌和應用，所述對蝦耦合抗菌肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述對蝦耦合抗菌肽代替目前水產飼料中使用的抗生素，以達到既可預防和治療動物疾病，又可減少濫用素帶來的不良后果的目的。

附圖說明

圖1為pPIC9K載體的質粒圖譜；

圖2為WAP+Crustinlike+pvHM117串聯表達序列插入pPIC9K載體示意圖；

圖3為瓊脂糖電泳結果圖；

圖4為1％瓊脂糖凝膠電泳圖；

圖5為電轉化后酵母在平板生長情況結果圖；

圖6為PCR鑒定重組酵母陽性克隆菌株結果圖；

圖7為WB(Western blot)鑒定上清液重組蛋白圖；

圖8為重組蛋白純化結果；

圖9為沙門氏菌抑菌圖；