[發(fā)明專利]一種可自組裝為蛋白納米顆粒的融合蛋白及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010175401.6
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111333733B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王恒樑;潘超;朱力;吳軍;黃競;張璐璐;孫鵬;曾明;王斌;劉先凱;王東澍;馮爾玲;劉波
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K39/385;A61K39/095;A61P31/04
• 代理公司: 中國貿(mào)促會專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 11038
• 代理人: 楊棽

1.融合蛋白，其中所述融合蛋白從N端至C端包含相鄰的AB5毒素B亞基和三聚化結(jié)構(gòu)域序列，所述融合蛋白進一步包含含有O-糖基化位點的糖基化序列，并且，所述融合蛋白中所包含的任何兩個相鄰結(jié)構(gòu)域之間通過肽接頭連接；其中，所述三聚化結(jié)構(gòu)域序列如SEQ IDNo.9所示，所述糖基化序列如SEQ ID NO.29所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述AB5毒素B亞基選自霍亂毒素B亞單位CTB，志賀毒素B亞單位StxB，大腸桿菌不耐熱性腸毒素B亞單位LTB或枯草桿菌毒素B亞單位SubB。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的融合蛋白，其中所述CTB由SEQ ID No.1所示的氨基酸序列組成；所述StxB由SEQ ID No.3所示的氨基酸序列組成；所述LTB由SEQ ID No.5所示的氨基酸序列組成；所述SubB由SEQ ID No.7所示的氨基酸序列組成。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白從N端至C端包含所述AB5毒素B亞基、三聚化結(jié)構(gòu)域序列和糖基化序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的融合蛋白，其中所述融合蛋白包含選自下列的氨基酸序列：

(1)由SEQ ID NO.21所示序列的第20位至第205位氨基酸殘基構(gòu)成的氨基酸序列；

(2)由SEQ ID NO.23所示序列的第20位至第190位氨基酸殘基構(gòu)成的氨基酸序列；

(3)由SEQ ID NO.25所示序列的第20位至第205位氨基酸殘基構(gòu)成的氨基酸序列；

(4)由SEQ ID NO.27所示序列的第20位至第242位氨基酸殘基構(gòu)成的氨基酸序列。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其進一步包含信號肽和/或蛋白標(biāo)簽。

7.分離的核酸分子，其編碼權(quán)利要求1-6任一項所述的融合蛋白。

8.載體，其包含權(quán)利要求7所述的分離的核酸分子。

9.宿主細胞，其包含權(quán)利要求7所述的分離的核酸分子或權(quán)利要求8所述的載體。

10.制備糖蛋白納米顆粒的方法，其包括以下步驟：

(1)提供O-抗原連接酶缺失的細菌宿主細胞；

(2)在所述細菌宿主細胞中表達權(quán)利要求1-6任一項所述的融合蛋白和糖基轉(zhuǎn)移酶PglL，從而產(chǎn)生目標(biāo)糖蛋白納米顆粒。

11.權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述細菌宿主細胞是病原性細菌細胞。

12.權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述方法還包括：(3)對目標(biāo)糖蛋白納米顆粒進行純化。

13.權(quán)利要求12所述的方法，其中，通過親和層析和/或分子篩對目標(biāo)糖蛋白納米顆粒進行純化。

14.權(quán)利要求10所述的方法，其中，步驟(2)包括以下步驟：

(2a)將編碼權(quán)利要求1-6任一項所述的融合蛋白的第一核苷酸序列和編碼PglL的第二核苷酸序列引入所述細菌宿主細胞中，其中所述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列被提供在相同或不同的表達載體上；

(2b)培養(yǎng)所述細菌宿主細胞；

(2c)從細胞培養(yǎng)物中回收目標(biāo)納米糖蛋白顆粒。

15.糖蛋白納米顆粒，其包含蛋白與多糖的偶聯(lián)物，所述偶聯(lián)物由細菌O多糖和權(quán)利要求1-6任一項所述的融合蛋白偶聯(lián)而成，所述細菌O多糖通過所述融合蛋白中的糖基化序列中的O-糖基化位點偶聯(lián)到所述融合蛋白上。

16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的糖蛋白納米顆粒，其中，所述細菌O多糖選自病原性細菌的O多糖。