[發(fā)明專利]一種可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010174682.3
• 申請(qǐng)日: 2020-03-13
• 公開（公告）號(hào): CN111560386A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于江;吳家強(qiáng);張玉玉;陳智;孫文博;韓紅;楊杰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12N15/34
• 分類號(hào): C12N15/34;C07K14/01;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 北京索睿邦知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11679
• 代理人: 劉麗

本發(fā)明涉及生物技術(shù)中蛋白表達(dá)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白。該可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白制成的鋁膠佐劑疫苗比油佐劑疫苗安全效果好，免疫后豬體吸收快，應(yīng)激小，比201佐劑免疫保護(hù)率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)中蛋白表達(dá)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白，還涉及可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的應(yīng)用。

背景技術(shù)

豬圓環(huán)病毒2型(Porcine circovirus 2，PCV2)是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的、危害養(yǎng)豬業(yè)較嚴(yán)重的病毒之一，該病毒與豬的多種疾病綜合征密切相關(guān)，包括豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(Post-weaning multi-systemic wasting syndrome，PMWS)和母豬的繁殖障礙(Sowabort ion and mortali ty syndrome，SAMS)等。自1991年加拿大首次報(bào)道PMWS以來(lái)，該病現(xiàn)已波及世界各地在2010年國(guó)際豬獸醫(yī)大會(huì)(IPVS)上，豬圓環(huán)病毒感染成為關(guān)注度最高的疾病，是全球公認(rèn)的危害養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病之一。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)豬圓環(huán)病毒感染呈上升趨勢(shì)，在我國(guó)豬群中流行十分嚴(yán)重，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失。

PCV2基因組全長(zhǎng)1767bp或1768bp，共包含11個(gè)開放閱讀框(ORF)，其中ORF1、ORF2是兩個(gè)最大的開放閱讀框，分別編碼復(fù)制相關(guān)蛋白(Rep蛋白)和衣殼蛋白(Cap蛋白)。Cap蛋白是主要的結(jié)構(gòu)蛋白，研究表明其N端含有一個(gè)由41個(gè)氨基酸殘基組成的核定位信號(hào)(NLS)，且含有大量的大腸埃希菌稀有密碼子，這將嚴(yán)重影響外源蛋白的表達(dá)。相關(guān)研究證實(shí)，Cap 蛋白免疫動(dòng)物可以產(chǎn)生病毒的中和抗體。ORF2基因已經(jīng)作為研制基因工程疫苗的重點(diǎn)對(duì)象。但是，目前Cap蛋白在原核表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)情況多以包涵體形式表達(dá)，對(duì)蛋白的純化帶來(lái)不便，其反應(yīng)原性和免疫原性亦不如可溶性蛋白好，因此研制可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白是擴(kuò)大其免疫應(yīng)用的一個(gè)重要研究方向。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決以上現(xiàn)有技術(shù)中豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白包涵體的問(wèn)題，本申請(qǐng)?zhí)峁┝艘环N可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白，表達(dá)此可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的豬圓環(huán)病毒2型ORF2 基因。如果蛋白具有可溶性，即可增強(qiáng)活性蛋白的比例，不用再經(jīng)過(guò)蛋白復(fù)性等繁瑣的過(guò)程，而且適合生物制品企業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。

本發(fā)明還提供了可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白的應(yīng)用。

本發(fā)明是通過(guò)以下步驟得到的：

一種豬圓環(huán)病毒2型ORF2基因，其核苷酸序列見序列表中序列1。

一種序列表中序列1表達(dá)得到的可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白。

優(yōu)選所述的可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白，1L細(xì)菌培養(yǎng)液中可溶性豬圓環(huán)病毒2型 Cap蛋白表達(dá)量為36.75mg。

優(yōu)選所述的可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白在制備免疫制劑中的應(yīng)用。

優(yōu)選所述免疫制劑為豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白滅活疫苗。

優(yōu)選滅活疫苗中佐劑為油佐劑、201佐劑或鋁膠佐劑。

優(yōu)選滅活疫苗中可溶性豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白濃度為100ug/ml。

本發(fā)明的有益效果：

通過(guò)對(duì)ORF2基因進(jìn)行剪接、修飾，將稀有密碼子進(jìn)行優(yōu)化，得到優(yōu)化后的豬圓環(huán)病毒2型 ORF2基因，其表達(dá)的豬圓環(huán)病毒2型Cap蛋白具有可溶性，增強(qiáng)了活性蛋白的比例，不用再經(jīng)過(guò)蛋白復(fù)性等繁瑣的過(guò)程，而且適合生物制品企業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)。該可溶性豬圓環(huán)病毒2 型Cap蛋白制成的鋁膠佐劑疫苗比油佐劑疫苗安全效果好，免疫后豬體吸收快，應(yīng)激小，比 201佐劑免疫保護(hù)率高。

附圖說(shuō)明

圖1為目的基因優(yōu)化前后核苷酸序列對(duì)比圖，上為優(yōu)化前序列，下為優(yōu)化后序列，