[發明專利]一種CXCR4基因的shRNA及其應用

在審

• 申請號: 202010174602.4
• 申請日: 2020-03-13
• 公開（公告）號: CN111235151A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發明（設計）人: 李光超;羅敏;丁雯
• 申請（專利權）人: 廣州百暨基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;A61K31/713;A61P35/00;A61P37/04
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種CXCR4基因的siRNA，其特征在于，所述siRNA包括如SEQ ID NO:1～6所示的核酸序列。

2.一種shRNA，其特征在于，所述shRNA包括莖環連接的反向重復序列；

所述反向重復序列包括CXCR4基因的siRNA和所述siRNA的反向重復序列；

優選地，所述shRNA包括正義鏈和反義鏈；

優選地，所述shRNA的莖環包括如SEQ ID NO:7～8所示的核酸序列；

優選地，所述shRNA包括如SEQ ID NO:9～20所示的核酸序列。

3.一種shRNA表達載體，其特征在于，所述shRNA表達載體包括如權利要求2所述的shRNA；

優選地，所述表達載體包括病毒載體；

優選地，所述病毒載體包括慢病毒載體、逆轉錄病毒載體或腺相關病毒載體中的任意一種，優選為慢病毒載體。

4.一種如權利要求3所述的shRNA表達載體的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

(1)根據CXCR4基因的siRNA設計shRNA；

(2)將shRNA插入表達載體中，得到所述shRNA表達載體；

優選地，所述shRNA插入表達載體的XhoI和EcoRV酶切位點。

5.一種重組慢病毒，其特征在于，所述重組慢病毒采用如權利要求3所述的表達載體與包裝輔助質粒共轉染哺乳細胞制備得到；

優選地，所述哺乳細胞包括293細胞、293T細胞或293F細胞中的任意一種或至少兩種的組合，優選為293T細胞。

6.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞轉染有如權利要求1所述的siRNA、如權利要求2所述的shRNA、如權利要求3所述的sgRNA表達載體或如權利要求5所述的重組慢病毒中的任意一種或至少兩種的組合；

優選地，所述宿主細胞包括免疫細胞；

優選地，所述免疫細胞包括T細胞。

7.一種沉默CXCR4基因的方法，其特征在于，所述方法包括：

將如權利要求1所述的siRNA、如權利要求2所述的shRNA、如權利要求3所述的shRNA表達載體或如權利要求5所述的重組慢病毒轉染宿主細胞，進行CXCR4基因的沉默。

8.一種CXCR4抑制劑，其特征在于，所述CXCR4抑制劑包括如權利要求1所述的siRNA、如權利要求2所述的shRNA、如權利要求3所述的shRNA表達載體或如權利要求5所述的重組慢病毒中的任意一種或至少兩種的組合。

9.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括如權利要求1所述的siRNA、如權利要求2所述的shRNA、如權利要求3所述的shRNA表達載體、如權利要求5所述的重組慢病毒、如權利要求6所述的宿主細胞或如權利要求8所述的CXCR4抑制劑中的任意一種或至少兩種的組合；

優選地，所述藥物組合物還包括藥學上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑中的任意一種或至少兩種的組合。

10.一種如權利要求1所述的siRNA、如權利要求2所述的shRNA、如權利要求3所述的shRNA表達載體、如權利要求5所述的重組慢病毒、如權利要求6所述的宿主細胞、如權利要求8所述的CXCR4抑制劑或如權利要求9所述的藥物組合物在制備疾病治療藥物中的應用；

優選地，所述疾病包括惡性腫瘤和/或免疫缺陷病。