[發明專利]一種無DMSO的冷凍保存液在器官和組織冷凍保存中的應用

在審

• 申請號: 202010172550.7
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111793112A
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發明（設計）人: 嚴杰;喬杰;閆麗盈;李蓉;王健君;金晟琳
• 申請（專利權）人: 北京大學第三醫院（北京大學第三臨床醫學院）;中國科學院化學研究所
• 主分類號: C07K5/062
• 分類號: C07K5/062;C07K5/068;C07K5/078;C07K5/083;A01N1/02
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 黃越;焦健

1.一種無DMSO的冷凍保存液在器官和/或組織冷凍保存中的應用，其特征在于，所述冷凍保存液以每100mL體積計，含有仿生控冰材料0.01-50g，多元醇5.0-45mL，水溶性糖0.1-1.0mol L^-1，血清0-30mL，余量為緩沖液，所述仿生控冰材料選自PVA和/或氨基酸類仿生控冰材料；優選地，所述器官為卵巢器官；所述組織為卵巢組織切片。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述氨基酸類仿生控冰材料選自聚合度≥2的聚氨基酸、氨基酸、肽類化合物中的一種或兩種以上；

優選地，所述肽類化合物為多肽、糖肽衍生物、或式(I)所示化合物，

其中，R選自取代或未取代的烷基，所述取代基可以選自-OH、-NH₂、-COOH、-CONH₂等，例如，R為取代或未取代的C1-6烷基，優選R為-CH₃、-CH₂CH₃、-CH₂CH₂COOH；n為大于等于1而小于等于1000的整數。

3.根據權利要求1或2所述的應用，所述控冰材料為PVA，所述PVA含量為0.1-6.0g；

優選，所述多元醇可以為C2-5的多元醇，例如乙二醇，丙二醇，丙三醇中的任一種；

優選，所述水溶性糖可以為非還原性雙糖、水溶性多糖、糖酐中的至少一種，例如選自蔗糖、海藻糖、羥丙基甲基纖維素、聚蔗糖中至少一種；

優選，所述緩沖液可以為DPBS、hepes-buffered HTF緩沖液、或其他細胞培養緩沖液中的至少一種；

優選，所述血清針對人源性冷凍保存對象可選人血清白蛋白或其替代物，例如十二烷基磺酸鈉，針對非人源性冷凍保存對象可選胎牛血清或牛血清白蛋白。

4.根據權利要求1-3任一項所述的應用，其特征在于，所述仿生控冰材料為聚氨基酸或氨基酸，所述控冰材料的含量為0.01-50g；

優選地，所述控冰材料為PVA與氨基酸和/或聚氨基酸的組合，例如由0.1-5.0g的PVA和8.0-35g的氨基酸和/或1.0-9.0g聚氨基酸組成。

5.根據權利要求1-4任一項所述的應用，其特征在于，所述PVA選自等規PVA、間規PVA和無規PVA的一種或兩種以上的組合，例如所述PVA的間同規整度為15％-60％，優選50％-60％；

優選，PVA選自分子量為10-500kDa或者更高分子量的PVA；

優選，所述PVA選自水解度為大于80％的PVA；

優選，所述聚氨基酸選自賴氨酸、精氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、組氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、甘氨酸等中至少一種的均聚物(聚合度≥2)；例如為聚-L-脯氨酸、聚-L-精氨酸中的一種或兩種以上的組合；所述聚氨基酸優選聚合度為2-40，更優選聚合度為2-20，例如聚合度為6、8、15、20等；

優選，所述多肽為兩種以上不同氨基酸組成，可選自L-Thr-L-Arg(TR),L-Thr-L-Pro(TP),L-Arg-L-Thr(RT),L-Pro-L-Thr(PT)，L-Thr-L-Arg-L-Thr(TRT),L-Thr-L-Pro-L-Thr(TPT),L-Ala-L-Ala-L-Thr(AAT)中的一種或兩種以上；

優選，所述糖肽衍生物為葡萄糖內酯(GDL)或其他糖類與親冰氨基酸通過化學鍵合而組成的分子，例如：GDL-L-Thr，GDL-L-Gln,GDL-L-Asn,GDL-L-Phe，GDL-L-Tyr，GDL-L-Val，GDL-L-Ser中的至少一種。

6.根據權利要求1-5任一項所述的應用，其特征在于，所述多元醇含量為6.0-28mL；

優選，所述血清含量為0；

優選，所述水溶性糖含量為0.2-0.5mol L^-1；

優選，所述冷凍保存液pH為6.5-7.6。