[發(fā)明專利]一種氨基酸類冷凍保存液及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010172548.X
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111789109B
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王健君;金晟琳;嚴(yán)杰;喬杰;閆麗盈;李蓉
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院化學(xué)研究所;北京大學(xué)第三醫(yī)院（北京大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院）
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京知元同創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11535
• 代理人: 黃越;焦健

1.一種氨基酸類冷凍保存液，其特征在于，每100 mL所述保存液中含有：氨基酸類仿生控冰材料 0.1-50g，多元醇 5.0-45 mL，DMSO 0-10 mL，血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白 0-30 mL，水溶性糖 0.1-1mol L^-1，緩沖液 余量；

所述氨基酸類仿生控冰材料為聚-L-精氨酸，所述聚-L-精氨酸的聚合度為8~15。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的冷凍保存液，其特征在于，所述多元醇為碳原子數(shù)為2-5的多元醇。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的冷凍保存液，其特征在于，所述多元醇為乙二醇，丙二醇，丙三醇中的任一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的冷凍保存液，其特征在于，所述水溶性糖為非還原性雙糖、水溶性多糖、糖酐中的至少一種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的冷凍保存液，其特征在于，所述水溶性糖選自蔗糖、海藻糖、水溶性纖維素、聚蔗糖。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的冷凍保存液，其特征在于，所述水溶性纖維素為羥丙基甲基纖維素。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的冷凍保存液，其特征在于，所述緩沖液選自DPBS或hepes-buffered HTF緩沖液或其他細胞培養(yǎng)緩沖液中的至少一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的冷凍保存液，其特征在于，每100mL所述冷凍保存液還含有0.1-6.0g的PVA。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的冷凍保存液，其特征在于，每100 mL冷凍保存液中所述DMSO含量為1.0-10mL。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的冷凍保存液，其特征在于，每100 mL冷凍保存液中所述血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白含量為10-15 mL。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的冷凍保存液，其特征在于，每100 mL冷凍保存液中所述水溶性糖含量為0.1-0.8 mol L^-1。

12.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的冷凍保存液，其特征在于，每100 mL冷凍保存液中所述多元醇含量為5.0-40mL。

13.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的冷凍保存液，其特征在于，所述冷凍保存液的pH為6.5-7.6。

14.如權(quán)利要求1-13任一項所述冷凍保存液的制備方法，包括如下步驟：

（1）將所述氨基酸類仿生控冰材料溶解于部分緩沖液，調(diào)節(jié)pH后形成溶液1；任選地，將PVA溶解于另外一部分緩沖液中，調(diào)節(jié)pH后得到溶液2；

（2）將水溶性糖溶解于第三部分的緩沖液中，待水溶性糖全部溶解后加入其他組分，制得溶液3；

（3）待溶液1、任選地溶液2、和溶液3冷卻至室溫后混合，調(diào)節(jié)pH并用緩沖液定容至預(yù)定體積，得到所述冷凍保存液。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的冷凍保存液的制備方法，其特征在于，當(dāng)所述冷凍保存液含有血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白時，所述血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白在所述冷凍保存液使用時添加。

16.一種氨基酸類冷凍保存用試劑，包括權(quán)利要求1-13任一項所述冷凍保存液和冷凍平衡液，所述平衡液和保存液彼此獨立存在；

所述冷凍平衡液，其特征在于，以每100mL體積計，含有多元醇5.0-45 mL，緩沖液余量；還任選地包括DMSO 0-15 mL，血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白0-30mL，和/或PVA 0-5.0 g。