[發(fā)明專利]用于檢測樣品中抗新型冠狀病毒SARS-COV-2的IgG抗體的試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010172184.5
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111458504A
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李雁飛;張凱;張志棟
• 申請（專利權(quán)）人: 中科歐蒙未一（北京）醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/545
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 孟凡宏;袁森

本申請公開了用于用免疫印跡法檢測樣品中抗新型冠狀病毒SARS?COV?2的IgG抗體的試劑盒。本申請還公開了該試劑盒在制備診斷新型冠狀病毒SARS?COV?2感染的產(chǎn)品中的用途。本申請?zhí)峁┑脑噭┖校哂胁僮鲿r間短、成本低、對機器依賴性低、可同時利用S蛋白和N蛋白進行檢測、檢測成本低、檢測效率高且檢測準(zhǔn)確率高等優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本申請涉及用于檢測樣品中抗新型冠狀病毒SARS-COV-2的 IgG抗體的試劑盒。更具體地，本申請涉及用于用免疫印跡法檢測樣品中抗新型冠狀病毒SARS-COV-2的IgG抗體的裝置、用于用免疫印跡法檢測樣品中抗新型冠狀病毒SARS-COV-2的IgG抗體的試劑盒、用免疫印跡法檢測樣品中抗新型冠狀病毒SARS-COV-2的IgG 抗體的方法、純化S蛋白抗原和純化N蛋白抗原的組合或該裝置或該試劑盒在檢測樣品中抗新型冠狀病毒SARS-COV-2的IgG抗體中的用途、以及純化S蛋白抗原和純化N蛋白抗原的組合或該裝置或該試劑盒在制備診斷新型冠狀病毒SARS-COV-2感染的產(chǎn)品中的用途。

背景技術(shù)

2019年12月以來，在世界各地爆發(fā)了新型冠狀病毒(即嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2，SARS-CoV-2)導(dǎo)致的肺炎疫情，此次流行的非典型肺炎是一種急性呼吸道傳染病，其主要通過近距離空氣飛沫和密切接觸傳播，起病急、傳播快、病死率高，因此危害極大。

針對上述疫情，如何快速、準(zhǔn)確地檢測出患者是否患有新型冠狀病毒肺炎至關(guān)重要。

目前，檢測新型冠狀病毒SARS-COV-2的一種方法是核酸檢測，其主要是基于熒光定量PCR(qRT-PCR)對病毒核酸進行檢測，檢測基因包括ORF1ab及N基因，除此之外核酸檢測還包括基于 CRISPR的快速檢測方法Sherlock，其識別基因為ORF1ab及S基因。目前，上述核酸檢測方法被定為新冠病毒檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但核酸檢測目前存在最大的問題是假陰性。造成核酸檢測假陰性的原因有很多，包括臨床采樣的誤差。實際上，在臨床檢驗過程中，鼻咽拭子、痰、下呼吸道分泌物、血液、糞便等標(biāo)本中均可檢測出新型冠狀病毒核酸，但由于采樣方法和采樣時間的限制，目前最常用的樣本是上呼吸道樣本。但是，病毒性肺炎患者在下呼吸道具有更高的病毒載量，所以下呼吸道分泌物的檢出率會更高一些。然而，獲取肺泡灌洗液等下呼吸道樣本操作上要求較高，且易噴濺，傳播風(fēng)險高，比較耗時，最終導(dǎo)致采集到的樣本不能反映患者或肺炎疑似患者的真實狀況。此外，樣本運輸?shù)南拗埔彩菍?dǎo)致核酸檢測出現(xiàn)假陰性的又一原因。各種RNA病毒的核酸由于自降解和生物酶介導(dǎo)的降解，是最難以穩(wěn)定保存的生物分子之一，其對樣本的儲存和運輸條件要求較高。但目前的檢測條件無法做到床旁檢測，從采樣到實際實驗檢測須經(jīng)過漫長的等待時間，樣本在一定程度上不能準(zhǔn)確反映被檢測者真實信息。除此之外，核酸檢測還存在耗時長、設(shè)備昂貴等問題。

此外，檢測新型冠狀病毒SARS-COV-2的另一種方法是蛋白檢測。目前主要為新冠病毒IgG/IgG抗體檢測試劑盒，其應(yīng)用的方法學(xué)主要包括免疫層析(膠體金法)、化學(xué)發(fā)光、ELISA、免疫熒光等等。但是，膠體金等檢測方法無法同時對樣本中的S蛋白和N蛋白進行檢測，只能對兩種蛋白進行單一指標(biāo)檢測，在實驗操作、產(chǎn)品和時間消耗方面不占優(yōu)勢。

于此同時，現(xiàn)有的研究表明，具有新冠病毒既往病史的患者體內(nèi)很長一段時間會存在IgG抗體。7天至數(shù)周之后，IgG比例占總抗體量最大隨著后期病毒的減少或消失，IgG抗體也會降低，并以記憶細(xì)胞的形式存在，再下次抗原的刺激下，會迅速做出免疫應(yīng)答，再次產(chǎn)生更大量的IgG。IgG抗體的存在會直接影響S蛋白與受體細(xì)胞的融合，從而阻斷病毒的增殖，因此檢測人血漿或血清種的IgG抗體不僅能夠?qū)σ伤苹颊哌M行診斷，而且對于之后的疫苗研制及治療后的效果也可進行監(jiān)測。

因此，非常需要開發(fā)一種用于檢測樣品中抗新型冠狀病毒SARS-COV-2的IgG抗體的新型試劑盒，以避免核酸檢測中出現(xiàn)的樣本采集操作困難、采集后的樣本不能準(zhǔn)確反應(yīng)肺炎疑似患者真實病情、樣本保存困難等問題，同時具有操作時間短，成本低，對機器依賴性低等優(yōu)點，并且還可同時對S蛋白和N蛋白進行檢測，既降低了檢測成本，又明顯縮短了檢測時間且提高了檢測效率和檢測準(zhǔn)確度。