[發明專利]一種氨基酸類冷凍保存液在干細胞凍存中的應用

有效

• 申請號: 202010171843.3
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111789105B
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 喬杰;嚴杰;閆麗盈;李蓉;王健君;金晟琳
• 申請（專利權）人: 北京大學第三醫院（北京大學第三臨床醫學院）;中國科學院化學研究所
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 黃越;焦健

1.一種氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，每100 mL所述氨基酸類冷凍保存液中含有：氨基酸類仿生控冰材料 0.1-50g，多元醇 5.0-45 mL，DMSO0-15 mL，血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白 0-30 mL，水溶性糖 0.1-1mol L^-1，緩沖液余量；

所述氨基酸類仿生控冰材料選自聚-L-精氨酸，所述聚-L-精氨酸的聚合度為8~15；

所述冷凍保存液的pH為6.5-7.6。

2.根據權利要求1所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，所述多元醇為碳原子數為2-5的多元醇。

3.根據權利要求2所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，所述多元醇選自乙二醇，丙二醇，丙三醇中的任一種。

4.根據權利要求1所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，所述水溶性糖為非還原性雙糖、水溶性多糖、糖酐中的至少一種。

5.根據權利要求4所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，所述水溶性糖選自蔗糖、海藻糖、水溶性纖維素、聚蔗糖。

6.根據權利要求1所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，所述緩沖液選自DPBS或hepes-buffered HTF緩沖液或其他細胞培養緩沖液中的至少一種。

7.根據權利要求1所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，每100 mL冷凍保存液中所述DMSO含量為1.0-10mL。

8.根據權利要求1所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，每100 mL冷凍保存液中所述血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白含量為10-15 mL。

9.根據權利要求1所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，每100 mL冷凍保存液中所述水溶性糖含量為0.1-0.8 mol L^-1。

10.根據權利要求1所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，每100 mL冷凍保存液中所述多元醇含量為5.0-40mL。

11.根據權利要求1所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，每100 mL所述冷凍保存液還含有0.1-6.0 g的聚乙烯醇PVA。

12.根據權利要求1-11任一項所述氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，所述氨基酸類冷凍保存液由如下方法制備得到，所述制備方法包括如下步驟：

（1）將所述氨基酸類仿生控冰材料溶解于部分緩沖液，調節pH后形成溶液1；任選地，將PVA溶解于部分緩沖液中，調節pH后得到溶液2；

（2）將水溶性糖溶解于部分的緩沖液中，待水溶性糖全部溶解后加入其他組分，制得溶液3；

（3）待溶液1、任選地溶液2、和溶液3冷卻至室溫后混合，調節pH并用緩沖液定容至預定體積，得到所述冷凍保存液；

任選地，當所述冷凍保存液含有血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白時，所述血清或人血清白蛋白或牛血清白蛋白在所述冷凍保存液使用時添加。

13.根據權利要求1-11所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，其特征在于，所述干細胞選自全能干細胞、多能干細胞或者專能干細胞中任一種。

14.據權利要求13所述的氨基酸類冷凍保存液在干細胞冷凍保存中的應用，所述干細胞選自胚胎干細胞、各類間充質干細胞、造血干細胞。