[發(fā)明專利]一種使用單個腫瘤細胞構(gòu)建小鼠腫瘤模型的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010170480.1
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN113383749A
• 公開（公告）日: 2021-09-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃波;劉玉英
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 北京戈程知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉;韓文華

本發(fā)明涉及一種使用單個腫瘤細胞構(gòu)建小鼠腫瘤模型的方法。具體地，根據(jù)本發(fā)明的方法包括將包含單個腫瘤細胞的纖維蛋白膠移植到小鼠的步驟；優(yōu)選地，所述方法包括將包含單個腫瘤細胞的纖維蛋白膠移植到小鼠皮下的步驟。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及一種使用單個腫瘤細胞建立小鼠腫瘤模型的方法以及該模型在研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展機制，篩選抗腫瘤藥物中的用途。

背景技術(shù)

惡性腫瘤作為一種嚴重威脅人類生命健康的疾病，至今沒有有效的治療手段，最主要的原因是腫瘤的發(fā)生發(fā)展機制依然尚未研究清楚。當今科學(xué)界普遍認為，在腫瘤的發(fā)生過程中，單個的腫瘤起始細胞，在合適的體內(nèi)微環(huán)境下，逐漸分裂增殖，最終形成病理可見的腫瘤組織。因此，腫瘤的發(fā)生發(fā)展，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，與腫瘤組織中個別具有自我更新，再生能力的腫瘤生成細胞，也稱為腫瘤干細胞，息息相關(guān)。并且，這部分腫瘤生成細胞往往在轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。因此，單個細胞成瘤模型的建立是此腫瘤發(fā)生發(fā)展過程模擬和研究的重要有效手段。然而，目前的科研手段依然無法從單個腫瘤細胞起建立生物腫瘤模型。在腫瘤的基礎(chǔ)科研中，合適的動物模型是研究腫瘤發(fā)生，發(fā)展機制和腫瘤治療的重中之重。因此，單細胞建立小鼠皮下異位瘤模型的建立對研究單個腫瘤起始細胞的細胞學(xué)特性和發(fā)展過程，以及對理解腫瘤的發(fā)生，發(fā)展有著重要的意義。

在現(xiàn)有階段的實驗研究手段中，研究人員都是通過多個腫瘤(10)的移植或化學(xué)誘導(dǎo)的方法建立起穩(wěn)定的動物腫瘤模型。這兩種腫瘤模型的建立方法無法有效地模擬單個腫瘤起始細胞在最初腫瘤發(fā)生，發(fā)展的過程，對科研人員研究腫瘤的發(fā)生發(fā)展造成了阻礙。建立起一種單個腫瘤細胞起始發(fā)生的動物腫瘤模型，是當代腫瘤研究的迫切需求。

發(fā)明內(nèi)容

在第一方面，本發(fā)明提供了一種構(gòu)建小鼠腫瘤模型的方法，所述方法包括將包含單個腫瘤細胞的纖維蛋白膠移植到小鼠的步驟；優(yōu)選地，所述方法包括將包含單個腫瘤細胞的纖維蛋白膠移植到小鼠皮下的步驟。

具體地，本發(fā)明提供了一種構(gòu)建小鼠腫瘤模型的方法，所述方法包括以下步驟：

1)將包含腫瘤細胞的培養(yǎng)基與纖維蛋白原混合，鋪于96孔板中；優(yōu)選地，所述纖維蛋白原的濃度為0.1至10μg/ml，更優(yōu)選濃度為4-8μg/ml；更優(yōu)選地，所述纖維蛋白原為人纖維蛋白原或三文魚纖維蛋白原；

2)向步驟1)中的96孔板中加入凝血酶，在37℃下孵育60分鐘；

3)向孔中加入培養(yǎng)基，37℃下培養(yǎng)6至12小時；

4)選擇包含單個腫瘤細胞的纖維蛋白膠，去除培養(yǎng)基，和

5)將步驟5)中獲得的包含單個腫瘤細胞的纖維蛋白膠移植到小鼠，優(yōu)選地，移植到小鼠皮下組織。

在根據(jù)本發(fā)明方法的一個優(yōu)選實施方案中，所述單個腫瘤細胞選自黑色素瘤、肝癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、骨髓瘤、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、頭和頸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、何杰金淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、彌漫性大B-細胞淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、急性成淋巴細胞性白血病、急性髓細胞樣白血病、慢性淋巴細胞性白血病、慢性髓細胞樣白血病、原發(fā)性縱隔大B-細胞淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、小淋巴細胞性淋巴瘤、富含T-細胞/組織細胞的大B-細胞淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、髓樣細胞白血病-1蛋白、骨髓異常增生綜合征、胃癌、卵巢癌、成淋巴細胞性白血病、淋巴細胞白血病、子宮內(nèi)膜癌、前列腺癌、甲狀腺癌、軟骨肉瘤、神經(jīng)母細胞瘤、胰腺癌、多形性成膠質(zhì)細胞瘤、骨癌、尤因氏肉瘤、子宮頸癌、腦癌、膀胱癌、透明細胞腎細胞癌、咽喉癌、肝膽癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癌、食管癌、惡性胸膜間皮瘤、全身性輕鏈淀粉樣變性、淋巴漿細胞性淋巴瘤、骨髓異常增生綜合征、骨髓增生性腫瘤、神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、梅克爾細胞癌、睪丸癌和皮膚癌的腫瘤細胞。

在第二方面，本發(fā)明提供了一種制備包含單個腫瘤細胞的纖維蛋白膠的方法，所述方法包括以下步驟：