[發(fā)明專利]一種Cre/lox瞬時表達載體系統(tǒng)及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010170072.6
• 申請日: 2020-03-12
• 公開（公告）號: CN111334525A
• 公開（公告）日: 2020-06-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉芳;吳剛;王盼娣;高鴻飛;武玉花;曾新華;閆曉紅;羅軍玲
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院油料作物研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11385
• 代理人: 朱玲艷

1.一種Cre/lox瞬時表達載體系統(tǒng)，其特征在于，包括植物表達載體pC35Spro::T7RP和植物表達載體pCT7pro::Cre；

所述植物表達載體pC35Spro::T7RP包括35S啟動子、lox位點、Bar基因、NOS終止子、35S啟動子、T7 RNA聚合酶酶基因、NOS終止子、lox位點和OXY基因；

所述植物表達載體pCT7pro::Cre包含35S啟動子、lox位點、Bar基因、NOS終止子，T7啟動子、Cre基因、T7終止子、lox位點和CP4 EPSPS基因；

所述Bar基因為草銨膦抗性基因；所述CP4 EPSPS基因為草甘膦抗性基因；所述OXY基因為溴苯腈抗性基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Cre/lox瞬時表達載體系統(tǒng)，其特征在于，所述Bar基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Cre/lox瞬時表達載體系統(tǒng)，其特征在于，所述CP4 EPSPS基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的Cre/lox瞬時表達載體系統(tǒng)，其特征在于，所述OXY基因的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1～4任意一項所述的Cre/lox瞬時表達載體系統(tǒng)，其特征在于，所述植物表達載體pC35Spro::T7RP的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求1～4任意一項所述的Cre/lox瞬時表達載體系統(tǒng)，其特征在于，所述植物表達載體pCT7pro::Cre的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

7.權(quán)利要求1～6任意一項所述的Cre/lox瞬時表達載體系統(tǒng)在制備轉(zhuǎn)基因抗性植物中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述植物包括油菜。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

1)將植物表達載體pC35Spro::T7RP和植物表達載體pCT7pro::Cre分別導(dǎo)入農(nóng)桿菌中獲得陽性農(nóng)桿菌；

2)將攜帶植物表達載體pC35Spro::T7RP的陽性農(nóng)桿菌和攜帶植物表達載體pCT7pro::Cre的陽性農(nóng)桿菌分別侵染甘藍型油菜獲得攜帶植物表達載體pC35Spro::T7RP的轉(zhuǎn)基因抗性油菜和攜帶植物表達載體pCT7pro::Cre的轉(zhuǎn)基因抗性油菜；

3)將所述攜帶植物表達載體pC35Spro::T7RP的轉(zhuǎn)基因抗性油菜和攜帶植物表達載體pCT7pro::Cre的轉(zhuǎn)基因抗性油菜雜交獲得刪除標記基因的轉(zhuǎn)基因抗性油菜。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟2)中所述甘藍型油菜為甘藍型油菜的黃化下胚軸。