[發(fā)明專利]靶向NKG2D的嵌合抗原受體、嵌合抗原受體T細(xì)胞及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請日: 2020-03-11
• 公開（公告）號: CN111363046A
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉茂玄;許晨光;黎琴子
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳賓德生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/10;C12N15/867;C12N15/62;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標(biāo)代理有限公司 44202
• 代理人: 熊永強(qiáng)

1.一種靶向NKG2D的嵌合抗原受體，其特征在于，所述靶向NKG2D的嵌合抗原受體的氨基酸序列包括從氨基端到羧基端順次連接的靶向NKG2D的單鏈抗體、胞外鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號區(qū)的氨基酸序列，其中，所述靶向NKG2D的的單鏈抗體包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

2.如權(quán)利要求1所述的靶向NKG2D的嵌合抗原受體，其特征在于，所述靶向NKG2D的嵌合抗原受體的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

3.如權(quán)利要求1所述的靶向NKG2D的嵌合抗原受體，其特征在于，所述靶向NKG2D的嵌合抗原受體的編碼基因包括如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。

4.一種靶向NKG2D嵌合抗原受體T細(xì)胞，其特征在于，其表面表達(dá)如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的靶向NKG2D的嵌合抗原受體。

5.一種重組載體，其特征在于，包括如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的靶向NK G2D的嵌合抗原受體的編碼基因。

6.一種靶向NKG2D的嵌合抗原受體T細(xì)胞的制備方法，其特征在于，包括：

(1)提供靶向NKG2D的嵌合抗原受體的編碼基因，包括從5’端到3’端順次連接的信號肽的編碼基因、靶向NKG2D的單鏈抗體的編碼基因、胞外鉸鏈區(qū)的編碼基因、跨膜區(qū)的編碼基因、胞內(nèi)信號區(qū)的編碼基因，其中，所述靶向NKG2D的單鏈抗體的編碼基因包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列所對應(yīng)的核苷酸序列；

(2)將所述靶向NKG2D的嵌合抗原受體的編碼基因插入到基因傳遞載體中，得到重組基因傳遞載體；

(3)將所述重組基因傳遞載體進(jìn)行包裝并轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，得到重組慢病毒；

(4)將所述重組慢病毒轉(zhuǎn)染CD3陽性T淋巴細(xì)胞，獲得靶向NKG2D的嵌合抗原受體T細(xì)胞。

7.如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的靶向NKG2D的嵌合抗原受體、如權(quán)利要求4所述的或如權(quán)利要求6所述的制備方法制得的靶向NKG2D的嵌合抗原受體T細(xì)胞、如權(quán)利要求5所述的重組載體在制備預(yù)防、診斷和治療惡性腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述惡性腫瘤為高表達(dá)NKG2D配體的腫瘤，包括肝癌、宮頸癌和胰腺癌。

9.一種預(yù)防、診斷和治療惡性腫瘤的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括如權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的靶向NKG2D的嵌合抗原受體、如權(quán)利要求4所述的或如權(quán)利要求6所述的制備方法制得的靶向NKG2D的嵌合抗原受體T細(xì)胞、如權(quán)利要求5所述的重組載體。

10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物還包括藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料。