[發(fā)明專(zhuān)利]一種血漿中丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸的聯(lián)合定量測(cè)定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010168379.2
• 申請(qǐng)日: 2020-03-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112540138A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹唯儀;李睿;高蕊
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/06
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 北京元本知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11308
• 代理人: 喻蓉

1.一種血漿中丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸的聯(lián)合定量測(cè)定方法，其特征是，包括如下步驟：

1)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

1-1)將丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸母液混合，配制成混合母液后，用甲醇-水溶液稀釋成濃度為0.025-30μg/mL的系列工作溶液；

1-2)分別取10μL工作溶液與40μL空白血漿、20μL內(nèi)標(biāo)工作溶液、300μL乙酸乙酯依次混勻后進(jìn)行第一次離心處理，并將第一次離心處理后的上清液進(jìn)行干燥處理，接著分別用50μL有機(jī)混合液將干燥后的殘留物分別復(fù)溶；然后再分別進(jìn)行第二次離心處理，離心后的上清液為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣本溶液，其中標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本溶液中丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸的濃度均分別為5-6000ng/mL；

1-3)分別取制備的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本溶液進(jìn)樣，進(jìn)行UPLC-MS/MS分析，記錄標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本溶液中丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸的色譜圖、色譜峰面積；然后分別以標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本溶液中丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸濃度與內(nèi)標(biāo)濃度之比為橫坐標(biāo)，丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積比為縱坐標(biāo)，采用最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，分別繪制得到丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程；

2)血漿樣本測(cè)定

取待測(cè)血漿樣本進(jìn)樣，進(jìn)行UPLC-MS/MS分析，記錄待測(cè)血漿樣本中丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸、內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的色譜圖、色譜峰面積；接著分別將待測(cè)血漿樣本中阿司匹林、水楊酸、丹酚酸B的色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積比、內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度分別帶入繪制的阿司匹林、水楊酸、丹酚酸B的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算得到待測(cè)血漿樣本中阿司匹林、水楊酸、丹酚酸B的濃度。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1-3)中所述UPLC-MS/MS分析過(guò)程中，液相色譜(UPLC)測(cè)定的色譜條件如下：流動(dòng)相：0.5％甲酸(A)-乙腈(B)。

3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是，所述液相色譜分離過(guò)程中，流動(dòng)相選擇梯度洗脫：0-0.3min，95％-75％A；0.3-1.3min，75％-70％A；1.3-2.1min，70％-30％A；2.1-2.5min，30％A；2.5-2.7min，30％-95％A；2.7-4.0min，95％A。

4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征是，步驟1-3)中所述UPLC-MS/MS分析過(guò)程中，所述質(zhì)譜檢測(cè)采用電噴霧離子化離子源將液相洗脫液離子化，采用負(fù)離子多反應(yīng)離子監(jiān)測(cè)掃描模式檢測(cè)血漿樣品中所述丹酚酸B、阿司匹林、水楊酸和內(nèi)標(biāo)的含量。

5.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的方法，其特征是，步驟2)中所述待測(cè)血漿樣本按照如下方法制備：將待測(cè)血漿與內(nèi)標(biāo)工作溶液、有機(jī)溶劑混勻后進(jìn)行第一次離心處理；將第一次離心處理后的上清液干燥后用有機(jī)混合液復(fù)溶；然后進(jìn)行第二次離心處理，第二次離心處理的上清液為待測(cè)血漿樣本。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征是，所述有機(jī)溶劑選擇乙酸乙酯、石油醚、正己烷、二氯甲烷或三氯甲烷，優(yōu)選為乙酸乙酯。