[發明專利]間充質干細胞球及其制備方法和應用以及成球培養基在制備間充質干細胞球中的應用

有效

• 申請號: 202010166926.3
• 申請日: 2020-03-11
• 公開（公告）號: CN111334466B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 趙雅君;張益;王衣祥;賀洋;肖鍔;何臨海;呂婉琪
• 申請（專利權）人: 北京大學口腔醫學院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;C12N5/073;C12Q1/02
• 代理公司: 北京潤平知識產權代理有限公司 11283
• 代理人: 劉依云;喬雪微

1.一種制備間充質干細胞球的方法，其特征在于，該方法包括將間充質干細胞接種至成球培養基中進行培養，得到間充質干細胞球；

其中，所述成球培養基包括基礎培養基和添加物，所述基礎培養基為DMEM/F12培養基；所述添加物為抗壞血酸-2-磷酸鎂、亞硒酸鈉、堿性成纖維細胞生長因子、胰島素、碳酸氫鈉、轉鐵蛋白和轉化生長因子；

其中，所述轉化生長因子為轉化生長因子TGFβ1或轉化生長因子Nodal；

其中，所述成球培養基中不含血清；

其中，1L所述成球培養基中，抗壞血酸-2-磷酸鎂的含量為64 mg，亞硒酸鈉的含量為14μg，堿性成纖維細胞生長因子的含量為100μg，胰島素的含量為19.4 mg，碳酸氫鈉的含量為0.543 g，轉鐵蛋白的含量為10.7mg，轉化生長因子的含量為TGFβ1的含量為2 μg，余量為DMEM/F12培養基；或

1L所述成球培養基中，抗壞血酸-2-磷酸鎂的含量為64 mg，亞硒酸鈉的含量為14 μg，堿性成纖維細胞生長因子的含量為100μg，胰島素的含量為19.4 mg，碳酸氫鈉的含量為0.543 g，轉鐵蛋白的含量為10.7mg，轉化生長因子的含量為Nodal的含量為100 μg，余量為DMEM/F12培養基。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述培養在細胞培養器中進行，所述細胞培養器為TC表面處理的細胞培養皿或TC表面處理的細胞培養板。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，間充質干細胞的接種密度為4×10⁴-5×10⁴個細胞/cm²培養面積。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述培養的條件使得間充質干細胞從貼壁狀態自動聚集成球。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述培養的條件包括：培養時間為3-5天。

6.根據權利要求1所述的方法，其中，所述間充質干細胞的制備方法包括：

（1）將在間充質干細胞培養基中貼壁生長的間充質干細胞消化后離心；

（2）用磷酸緩沖液清洗后，再次離心，得到用于培養細胞球的所述間充質干細胞。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述的方法，其中，所述間充質干細胞為人間充質干細胞或動物間充質干細胞。

8.根據權利要求1-6中任意一項所述的方法，其中，所述間充質干細胞選自脂肪間充質干細胞、骨髓間充質干細胞、牙髓間充質干細胞、臍帶間充質干細胞、胎盤間充質干細胞和羊膜間充質干細胞中的一種。

9.一種成球培養基在制備間充質干細胞球中的應用，其特征在于，所述成球培養基包括基礎培養基和添加物，所述基礎培養基為DMEM/F12培養基；所述添加物為抗壞血酸-2-磷酸鎂、亞硒酸鈉、堿性成纖維細胞生長因子、胰島素、碳酸氫鈉、轉鐵蛋白和轉化生長因子；

其中，所述轉化生長因子為轉化生長因子TGFβ1或轉化生長因子Nodal；

其中，所述成球培養基中不含血清；

其中，1L所述成球培養基中，抗壞血酸-2-磷酸鎂的含量為64 mg，亞硒酸鈉的含量為14μg，堿性成纖維細胞生長因子的含量為100μg，胰島素的含量為19.4 mg，碳酸氫鈉的含量為0.543 g，轉鐵蛋白的含量為10.7mg，轉化生長因子的含量為TGFβ1的含量為2 μg，余量為DMEM/F12培養基；或

1L所述成球培養基中，抗壞血酸-2-磷酸鎂的含量為64 mg，亞硒酸鈉的含量為14 μg，堿性成纖維細胞生長因子的含量為100μg，胰島素的含量為19.4 mg，碳酸氫鈉的含量為0.543 g，轉鐵蛋白的含量為10.7mg，轉化生長因子的含量為Nodal的含量為100 μg，余量為DMEM/F12培養基。