[發明專利]靶向CD22的嵌合抗原受體及其應用

在審

• 申請號: 202010165098.1
• 申請日: 2020-03-11
• 公開（公告）號: CN111320703A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 李香群;陳波
• 申請（專利權）人: 北京雙贏科創生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N7/01;C12N5/10;A61K35/17;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 北京中譽威圣知識產權代理有限公司 11279
• 代理人: 賈慧娜;王芊雨

本發明公開了一種靶向CD22的嵌合抗原受體及其應用。所述嵌合抗原受體序列選自如下兩種結構中的一種，第一種結構：CD22抗原結合結構域與T細胞受體(TCR)的恒定結構域；第二種結構：順序串聯的跨膜蛋白信號肽、CD22抗原結合結構域、CD8蛋白分子的鉸鏈區、跨膜區、4?1BB共刺激結構域與CD3ζ胞內信號傳導結構域；該嵌合抗原受體較傳統CD28、4?1BB共刺激結構域顯示出了更有持續性的抗腫瘤活性，可與CD19嵌合抗原受體T細胞聯合、序貫應用，提高CART細胞對腫瘤細胞的覆蓋率，或于CD19嵌合抗原受體T細胞治療白血病陰性復發時應用，在血液及淋巴系統惡性腫瘤的治療上有良好的應用前景。

技術領域

本發明是關于生物醫藥技術領域，特別是關于一種靶向CD22的嵌合抗原受體及其應用。

背景技術

過繼性免疫細胞治療(adoptive cell therapy,ACT)是指從腫瘤患者分離免疫活性細胞，在體外進行擴增與功能鑒定后，然后再回輸給患者，從而直接殺傷腫瘤或激發機體的免疫應答殺傷腫瘤細胞。

免疫治療(Immunotherapy)是繼手術、放療、化療之后的第四種腫瘤治療方法。嵌合抗原受體(chimeric antigen receptor,CAR)T細胞技術是新近迅速發展的一種細胞免疫治療技術，CAR是一個人工合成的融合受體，在結構上包括胞外抗原結合區、跨膜區、胞內信號轉導區與共刺激信號區。胞外區為識別腫瘤相關抗原的單克隆抗體序列(singlechain variable fragment，ScFV)，跨膜區連接胞外區與胞內區，常用的跨膜區分子有CD3、CD4、CD8與CD28等。胞內區具有免疫受體酪氨酸活化基序(ITAM)，最常用的是T細胞受體TCR/CD3ζ鏈和免疫球蛋白FC受體FCεRIγ，主要負責信號轉導功能；人們通過分子克隆方法將上述元件在體外進行重組，形成重組質粒，通過病毒載體、電穿孔等手段將重組質粒轉導入T細胞，繼之在體外培養擴增，最后回輸到病人體內，起到治療腫瘤的目的，這種經過基因修飾與改造的T細胞即稱為CAR-T細胞。CAR-T細胞通過ScFV段識別并結合腫瘤抗原，再通過CD3ζ鏈和共刺激信號區激活T細胞，這樣改造的CAR-T細胞識別、殺傷腫瘤細胞就具有了兩大特點：①靶向性；②克服了MHC限制性，即不再依賴MHC，因此突破了腫瘤細胞通過下調MHC的表達而發生免疫逃逸這一難題。

雖然靶向腫瘤表面抗原CD19的嵌合抗原受體T細胞在治療急性B細胞白血病方面取得了高達93％的完全緩解(CR)率，但最終復發率也很高，文獻以CD28為共刺激結構域的復發率高達50％，以4-1BB為共刺激結構域的復發率高達33％,所以有必要尋找新的靶點，作為CD19靶點的替代與補充。

腫瘤表面抗原CD22是一分子量為140kDa的糖蛋白，是唾液酸結合免疫球蛋白樣免疫球蛋白樣凝集素家族的一員，有幾個Ig樣的胞外區。它限制性表達在B細胞惡性腫瘤與正常B細胞中，60-80％的B細胞惡性腫瘤表達CD22。幾乎所有的B前體細胞急性淋巴細胞白血病(B-ALL)表達CD22，90％以上的彌漫大B細胞淋巴瘤(DLBCL)和濾泡淋巴瘤(FL)表達CD22；慢性淋巴細胞白血病(B-CLL)、毛細胞白血病(HCL)也具有高水平的CD22表達。與CD19類似，CD22同樣是B細胞限制性表達，實質細胞與造血干細胞皆不表達CD22，因此CD22是CAR-T治療惡性B細胞血液腫瘤療法中，繼CD19之外的又一理想靶點，也是目前很多單抗藥物的靶抗原。

經典的嵌和抗原受體(CAR)結構由信號肽、識別抗原的抗體單鏈可變區、鉸鏈區、跨膜區、共刺激區以及CD3ζ鏈依次串聯而成(圖1)，常用的共刺激區是4-1BB或CD28。