[發明專利]一種金黃色葡萄球菌檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 202010164949.0
• 申請日: 2020-03-11
• 公開（公告）號: CN111323596B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 趙薇;趙超;王娟;李可維
• 申請（專利權）人: 趙薇
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 李外

本發明提供一種金黃色葡萄球菌檢測試劑盒及其制備方法，屬于試劑盒領域。該試劑盒包被有金納米顆粒的免疫磁珠探針、金納米粒子探針、刻蝕溶液和標準菌液。所述的包被有金納米顆粒的免疫磁珠探針是先制備包被有金納米顆粒的磁珠，將磁珠與金黃色葡萄球菌特異性雞卵黃抗體IgY偶聯得到免疫磁珠探針；所述的金納米粒子探針是先合成金納米粒子，將其與金黃色葡萄球菌特異性適配體偶聯得到的；利用本發明制備的試劑盒進行金黃色葡萄球菌檢測具有特異性強、靈敏度高、檢測時間短的優勢，最低檢測濃度低至10cfu/mL，可用于食品中金黃色葡萄球菌的檢測。

技術領域

本發明屬于試劑盒領域，具體提供一種金黃色葡萄球菌檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

金黃色葡萄球菌(Staphylococcus?aureus，金葡菌)是一種重要的食源性致病菌，可以通過各種途徑污染食品，引發中毒等多種食源性疾病，主要的急性癥狀有惡心，嘔吐，嚴重可導致死亡。因此，開發一種簡單，靈敏，特異的金黃色葡萄球菌檢測方法具有重要意義。目前我國對于金葡菌的檢測方法以傳統的微生物培養、生化鑒定等為主，這些方法操作繁瑣、耗時長，難以滿足快速檢測的要求。

近年來，為了加快檢測速度，提高檢測結果的準確率，研究者們開發了許多替代方法，如聚合酶鏈式反應(PCR)、環介導等溫擴增技術(LAMP)、酶聯免疫吸附法(ELISA)等，但是這些方法具有成本高、儀器設備復雜或靈敏度較低的缺點，限制了其廣泛應用，也不利于樣品的現場檢測。所以，非常必要有開發一種快，靈敏度高，特異性強的檢測手段，來監控食源性致病菌，以保障人們的食品安全。

發明內容

本發明目的是提供一種金黃色葡萄球菌檢測試劑盒及其制備方法，該試劑盒能快速、靈敏、簡便的檢測金黃色葡萄球菌。

本發明首先提供一種金黃色葡萄球菌檢測試劑盒，包括：

包被有金納米顆粒的免疫磁珠探針、金納米粒子探針、刻蝕溶液和標準菌液。

本發明還提供一種金黃色葡萄球菌檢測試劑盒的制備方法，包括：

步驟一：包被有金納米顆粒的磁珠的制備

將FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O溶于去離子水中，劇烈攪拌，逐滴加入NaOH，充分攪拌，使溶液pH值為12；使用永磁鐵分離混合物中的黑色固體物質，進行清洗，將固體產物于37℃環境中放置，然后沖洗干燥，得到黑色固體產物；

將上述黑色固體產物溶于去離子水中，超聲至分散均勻，加入EDTA-NaOH溶液和CTAB溶液，混合均勻，再加入氯金酸溶液和NaOH溶液，混合均勻，最后加入鹽酸羥胺后攪拌至溶液均勻無沉淀；將混合物室溫條件下放置，獲得包被有金納米顆粒的磁珠；

步驟二：免疫磁珠探針的制備

取包被有金納米顆粒的磁珠，加入EDC和NHS活化羧基，磁分離去上清，PBS清洗，加入金黃色葡萄球菌特異性雞卵黃抗體IgY反應，磁分離去上清，PBS清洗，重懸于PBS中，得到免疫磁珠探針；

步驟三：金納米粒子探針的制備

稱取檸檬酸三鈉和檸檬酸，溶于去離子水，制備檸檬酸混合液，取氯金酸溶于去離子水中，得到氯金酸溶液，攪拌加熱至劇烈沸騰；然后加入檸檬酸混合液，繼續加熱攪拌至溶液呈酒紅色；移除熱源冷卻至室溫，得到金納米粒子；

取金黃色葡萄球菌特異性適配體，95℃加熱5分鐘，4℃冷卻5分鐘；加入上述金納米粒子，室溫反應過夜，得到金納米粒子探針；

步驟四：刻蝕溶液和標準菌液的制備

優選的是，所述步驟一的FeCl₃·6H₂O和FeCl₂·4H₂O的摩爾濃度比為2：1。