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[發(fā)明專利]一種堿基編輯工具及其用途有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 202010163058.3 申請日: 2020-03-10
公開(公告)號: CN111172133B 公開(公告)日: 2021-12-31
發(fā)明(設(shè)計)人: 劉亞京;黃師圣;黃行許 申請(專利權(quán))人: 上??萍即髮W(xué)
主分類號: C12N9/22 分類號: C12N9/22;C12N15/55;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90
代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219 代理人: 嚴晨;許亦琳
地址: 201210 上*** 國省代碼: 上海;31
權(quán)利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 一種 堿基 編輯 工具 及其 用途
【權(quán)利要求書】:

1.一種融合蛋白,所述融合蛋白自N端至C端依次包括第一nCas9片段、嵌合插入片段、第二nCas9片段和兩個UGI片段,所述嵌合插入片段選自APOBEC1片段或APOBEC3A片段;

所述第一nCas9片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示;以及,所述第二nCas9片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

2.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述APOBEC1片段的氨基酸序列如SEQID NO. 3所示。

3.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述APOBEC3A片段的氨基酸序列如SEQID NO. 4所示。

4.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述UGI片段的氨基酸序列如SEQ IDNO. 5所示。

5.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白還包括核定位信號片段。

6.如權(quán)利要求5所述的融合蛋白,其特征在于,所述核定位信號片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。

7.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白還包括柔性連接肽片段。

8.如權(quán)利要求7所述的融合蛋白,其特征在于,所述柔性連接肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 7或SEQ ID NO. 8所示。

9.如權(quán)利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo. 9~10其中之一所示。

10.一種分離的多核苷酸,編碼如權(quán)利要求1~9任一權(quán)利要求所述的融合蛋白。

11.一種構(gòu)建體,所述構(gòu)建體含有如權(quán)利要求10所述的分離的多核苷酸。

12.一種表達系統(tǒng),所述表達系統(tǒng)含有如權(quán)利要求11所述的構(gòu)建體或基因組中整合有外源的如權(quán)利要求10所述的多核苷酸。

13.如權(quán)利要求12所述的表達系統(tǒng),其特征在于,所述表達系統(tǒng)的宿主細胞選自真核細胞。

14.如權(quán)利要求13所述的表達系統(tǒng),其特征在于,所述真核細胞選自小鼠細胞或人細胞。

15.如權(quán)利要求14所述的表達系統(tǒng),其特征在于,所述真核細胞選自小鼠腦神經(jīng)瘤細胞、人胚胎腎細胞、或人宮頸癌細胞、人結(jié)腸癌細胞或人骨肉瘤細胞。

16.如權(quán)利要求15所述的表達系統(tǒng),其特征在于,所述真核細胞選自N2a細胞、HEK293FT細胞、Hela細胞、HCT116細胞、或U2OS細胞。

17.如權(quán)利要求1~9任一權(quán)利要求所述的融合蛋白、如權(quán)利要求10所述的分離的多核苷酸、如權(quán)利要求11所述的構(gòu)建體或如權(quán)利要求12~16任一權(quán)利要求所述的表達系統(tǒng)在基因編輯中的用途。

18.如權(quán)利要求17所述的用途,其特征在于,所述用途具體為在真核生物的基因編輯中的用途。

19.一種堿基編輯體系,包括如權(quán)利要求1~9任一權(quán)利要求所述的融合蛋白,所述堿基編輯體系還包括sgRNA。

20.一種基因編輯方法,包括:通過如權(quán)利要求1~9任一權(quán)利要求所述的融合蛋白、或如權(quán)利要求19所述的堿基編輯體系進行基因編輯。

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