[發明專利]一種堿基編輯工具及其用途

有效

• 申請號: 202010163058.3
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111172133B
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發明（設計）人: 劉亞京;黃師圣;黃行許
• 申請（專利權）人: 上?？萍即髮W
• 主分類號: C12N9/22
• 分類號: C12N9/22;C12N15/55;C12N15/113;C12N15/85;C12N15/90
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 嚴晨;許亦琳

1.一種融合蛋白，所述融合蛋白自N端至C端依次包括第一nCas9片段、嵌合插入片段、第二nCas9片段和兩個UGI片段，所述嵌合插入片段選自APOBEC1片段或APOBEC3A片段；

所述第一nCas9片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 1所示；以及，所述第二nCas9片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示。

2.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述APOBEC1片段的氨基酸序列如SEQID NO. 3所示。

3.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述APOBEC3A片段的氨基酸序列如SEQID NO. 4所示。

4.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述UGI片段的氨基酸序列如SEQ IDNO. 5所示。

5.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白還包括核定位信號片段。

6.如權利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述核定位信號片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。

7.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白還包括柔性連接肽片段。

8.如權利要求7所述的融合蛋白，其特征在于，所述柔性連接肽片段的氨基酸序列如SEQ ID NO. 7或SEQ ID NO. 8所示。

9.如權利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo. 9~10其中之一所示。

10.一種分離的多核苷酸，編碼如權利要求1~9任一權利要求所述的融合蛋白。

11.一種構建體，所述構建體含有如權利要求10所述的分離的多核苷酸。

12.一種表達系統，所述表達系統含有如權利要求11所述的構建體或基因組中整合有外源的如權利要求10所述的多核苷酸。

13.如權利要求12所述的表達系統，其特征在于，所述表達系統的宿主細胞選自真核細胞。

14.如權利要求13所述的表達系統，其特征在于，所述真核細胞選自小鼠細胞或人細胞。

15.如權利要求14所述的表達系統，其特征在于，所述真核細胞選自小鼠腦神經瘤細胞、人胚胎腎細胞、或人宮頸癌細胞、人結腸癌細胞或人骨肉瘤細胞。

16.如權利要求15所述的表達系統，其特征在于，所述真核細胞選自N2a細胞、HEK293FT細胞、Hela細胞、HCT116細胞、或U2OS細胞。

17.如權利要求1~9任一權利要求所述的融合蛋白、如權利要求10所述的分離的多核苷酸、如權利要求11所述的構建體或如權利要求12~16任一權利要求所述的表達系統在基因編輯中的用途。

18.如權利要求17所述的用途，其特征在于，所述用途具體為在真核生物的基因編輯中的用途。

19.一種堿基編輯體系，包括如權利要求1~9任一權利要求所述的融合蛋白，所述堿基編輯體系還包括sgRNA。

20.一種基因編輯方法，包括：通過如權利要求1~9任一權利要求所述的融合蛋白、或如權利要求19所述的堿基編輯體系進行基因編輯。