[發(fā)明專利]一種多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株及其構建方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010162883.1
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111363721B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發(fā)明（設計）人: 唐鵬;吳瑾
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12Q1/02
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

本發(fā)明涉及一種多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株及其構建方法和應用，屬于腫瘤生物學技術領域。在構建過程中利用模擬臨床化療方式的間歇刺激法誘導耐藥細胞株，使最終獲得的耐藥細胞株更能反映臨床實況，更好地用于研究臨床耐藥的機制。由該方法構建的多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株能為研究耐藥腫瘤細胞形態(tài)學及生物學特點、分析化療藥物敏感性、研究雌激素和/或孕激素陽性的非浸潤性乳腺癌的耐藥機制、腫瘤細胞的耐藥性逆轉、篩選化療藥物、開發(fā)腫瘤耐藥逆轉藥物、開發(fā)及評價新的抗癌方法等提供最接近臨床病發(fā)特點的細胞模型，該多藥耐藥細胞株具有廣闊的基礎科研價值和臨床轉化價值。

技術領域

本發(fā)明屬于腫瘤生物學技術領域，具體涉及一種多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株及其構建方法和應用。

背景技術

乳腺癌是全世界女性最常見和最高致死率的惡性腫瘤，其中l(wèi)uminal型乳腺癌，即激素受體陽性乳腺癌約占所有類型乳腺癌的75-80％。國際臨床實踐權威指南——腫瘤學臨床實踐指南(NCCN)中指出，雌激素和/或孕激素陽性的非浸潤性乳腺癌腫瘤組織大于1cm時，考慮進行全身輔助內分泌治療和輔助化療，以期達到殺滅亞臨床病灶的目的。但在大量臨床實踐中有部分luminal型乳腺癌病人在輔助化療時出現(xiàn)耐藥，腫瘤組織體積在化療中不變甚至增大，導致治療失敗并為后期腫瘤的復發(fā)和轉移留下隱患，嚴重降低患者的無病生存率(DFS)和總體生存率(OS)。更糟糕的是這種耐藥往往表現(xiàn)為多藥耐藥性，即同時對多種結構和作用機制的化療藥物產(chǎn)生交叉耐藥現(xiàn)象，成為整體化療失敗的主要原因。目前，國內外關于建立三陰性乳腺癌耐藥細胞株的研究已經(jīng)比較常見，但對乳腺癌臨床發(fā)病最多的lunimal型乳腺癌耐藥株的研究卻較為較少見。

發(fā)明內容

有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株；目的之二在于提供一種多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株的構建方法；目的之三在于提供一種多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株在作為接近臨床病發(fā)特點的細胞模型的應用。

為達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

1、一種多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株，所述多藥耐藥細胞株為T47D/DOC，保藏編號為CCTCC NO：C202038；或為MCF-7/DOC，保藏編號為CCTCC NO：C202039，均由中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏。

優(yōu)選地，所述多藥耐藥細胞株對多西他賽、表柔比星、環(huán)磷酰胺或吉西他濱中的一種或多種具有耐藥性。

2、所述的一種多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株的構建方法，所述方法如下：

(1)將人luminal型乳腺癌細胞株常規(guī)培養(yǎng)于培養(yǎng)液中，置于培養(yǎng)箱中維持培養(yǎng)；

(2)培養(yǎng)至細胞飽和密度為70-90％時，換入新鮮培養(yǎng)液，并加入多西他賽至所述多西他賽的終濃度為所述人luminal型乳腺癌細胞株在所述多西他賽中的IC50濃度，繼續(xù)培養(yǎng)4-12h后再次換入新鮮培養(yǎng)液，接著繼續(xù)培養(yǎng)3-4d后再次換入新鮮培養(yǎng)液，再繼續(xù)培養(yǎng)至細胞飽和密度為90％以上，傳代1次；

(3)重復步驟(2)的操作，直至獲得在所述多西他賽中的IC50濃度為親本人luminal型乳腺癌細胞株在所述多西他賽中的IC50濃度10倍以上的人luminal型乳腺癌細胞株，即獲得多西他賽誘導建立的luminal型乳腺癌多藥耐藥細胞株。

優(yōu)選地，所述方法如下：

(1)將人luminal型乳腺癌T47D細胞株常規(guī)培養(yǎng)于含有100U/mL青霉素，100μg/mL鏈霉素，0.2Units/mL牛胰島素和10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，置于37℃、5％CO₂、95％濕度培養(yǎng)箱中維持培養(yǎng)；