[發明專利]特異結合結核分枝桿菌的氨基酸序列、核苷酸序列及應用

有效

• 申請號: 202010162607.5
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111285920B
• 公開（公告）日: 2022-08-30
• 發明（設計）人: 薛頔;魏萌萌;林雪;王玉炯
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學總醫院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12N15/11;G01N33/569;A61K47/42;A61K47/64;A61P31/06
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 陳風平

本發明公開了一種特異結合結核分枝桿菌的氨基酸序列或其衍生物，所述氨基酸序列或其衍生物含有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本發明還公開了編碼該氨基酸的核苷酸序列以及該氨基酸序列的應用。本發明公開的氨基酸序列，可特異結合分枝桿菌，用于結核病的診斷，提高診斷靈敏度和特異性，為結核病靶向診斷提供一種新的方法。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種特異結合結核分枝桿菌的氨基酸序列、核苷酸序列及應用。

背景技術

結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染引起的結核病(Tuberculosis,TB)是一種嚴重威脅公共衛生安全的世界性傳染病。在結核病治療方面，盡管大多數患者通過藥物治療可以康復，但患者康復后體內仍然有少量的滯留菌，當機體處于免疫抑制狀態或者免疫力低下時，滯留菌會大量增殖，再次導致結核病的發生。隨著近年M.tb多重耐藥性菌株的出現、結核病病原體的交叉感染、人口流動的增加以及對結核病控制的忽視等因素，都使得結核病的防控難度加大。

巨噬細胞是機體抵抗M.tb感染的主要初始效應細胞，同時也是M.tb潛伏感染的主要宿主細胞。M.tb與巨噬細胞的相互作關系極其復雜，首先，M.tb由呼吸道進入體內，經吞噬作用被巨噬細胞攝入胞內，刺激巨噬細胞產生細胞因子和趨化因子，這些因子在誘導天然免疫，獲得性免疫和凋亡過程中發揮重要作用。當M.tb存在于成熟的吞噬體中時，巨噬細胞中的溶酶體酶，抗菌肽等可進一步殺傷M.tb。但M.tb自身具有多種逃逸巨噬細胞殺傷的機制，包括改變巨噬細胞的攝取方式、抑制并抵制吞噬小體的酸化、抑制吞噬溶酶體的形成、抑制巨噬細胞的凋亡等，最終導致機體潛伏感染。

1985年，Smith第一次將外源基因插入絲狀噬菌體的基因，使目的基因編碼的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌體表面，從而創建了噬菌體展示技術，自此開啟了靶向肽研究的新篇章。噬菌體展示技術是以抗原表位為切入點，篩選出可以和M.tb特異結合的短肽。Smith通過基因工程的手段將EcoRⅠ內切酶的一個基因片段插入到絲狀噬菌體的外殼蛋白基因gⅢ中，使得EcoRⅠ內切酶的這個片段與噬菌體的外殼蛋白PⅢ融合表達。該技術可以將外源基因與絲狀噬菌體外殼蛋白基因融合，從而使外源蛋白或多肽以融合蛋白的形式融合表達在PⅧ或PⅢ的N端，進而展示在噬菌體顆粒的表面。被展示的蛋白或多肽可保持相對獨立的空間結構和生物活性，并且不影響噬菌體的包裝和復制。通過生物淘選，可以從噬菌體庫中選擇性地得到與靶分子相結合的多肽，從而分離展示可以特異性結合靶向蛋白的噬菌體。將噬菌體展示技術應用到疾病的影像和治療當中是目前新興的疾病診斷治療思路。

早期診斷是治療和終止結核病的首要環節，但是傳統的生物學技術例如鏡鑒法，培養法存在假陽性，易污染，耗時長，無法定量等缺點，難以在基層實驗室開展；隨著分子診斷技術的不斷發展，衍生出全自動實時熒光核酸擴增等技術，又存在成本高，技術難度大等缺陷，不能普遍使用。總的來說，現有實驗室診斷方法還存在很多的局限性，找到一種快速、準確、經濟、方便的診斷方法十分必要。

發明內容

發明目的：針對上述結核分枝桿菌引起的結核病的檢測的成本及技術上的缺陷和不足，本發明的目的在于提供一種氨基酸序列，通過該氨基酸序列對結合分枝桿菌的特異專一結合，用于結核病的診斷，提高診斷靈敏度和特異性，為結核病靶向診斷提供一種新的方法。本發明提供了一種編碼該氨基酸序列的核苷酸序列。本發明還提供了氨基酸序列的應用。

技術方案：本發明第一方面提供了一種特異結合結核分枝桿菌的氨基酸序列或其衍生物，所述氨基酸序列或其衍生物含有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

本發明第二方面提供了一種特異結合結核分枝桿菌的短肽或其衍生物，所述短肽的序列如SEQ ID NO：1所示。

本發明第三方面提供了編碼上述短肽的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ IDNO：2所示。

本發明第四方面提供了上述的氨基酸序列或短肽或核苷酸序列在制備檢測結核分枝桿菌試劑盒或產品中的應用。