[發(fā)明專(zhuān)利]牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用純化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010161560.0
• 申請(qǐng)日: 2020-03-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111304095B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 秦小波
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 秦小波
• 主分類(lèi)號(hào): C12N1/14
• 分類(lèi)號(hào): C12N1/14;C12N1/02;C12R1/645
• 代理公司: 成都玖和知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51238
• 代理人: 胡琳梅

1.一種牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基，其特征在于，包括馬鈴薯浸出液，葡萄糖，白蘿卜汁，硝酸銨，MgCl₂，KCl，丁酸鈉，瓊脂和水；

每1000mL的所述培養(yǎng)基包括150～200g去皮馬鈴薯、15.0～20.0g葡萄糖、5～10mL白蘿卜汁、1.0～2.0g硝酸銨、1.0～2.0g MgCl₂、1.0～2.0g KCl、0.5～1.5g丁酸鈉、20.0～30.0g瓊脂，余量為水。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基，其特征在于，還包括氨芐青霉素和鏈霉素。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基，其特征在于，所述白蘿卜汁的制備方法為：將白蘿卜榨汁后，經(jīng)紗布過(guò)濾得無(wú)渣的白蘿卜汁。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)稱(chēng)取150-200g去皮馬鈴薯，加水煮沸20-30分鐘后，紗布過(guò)濾得馬鈴薯浸出液，然后加入葡萄糖15.0～20.0g，白蘿卜汁5～10mL，硝酸銨1.0～2.0g，MgCl₂ 1.0～2.0g，KCl 1.0～2.0g，丁酸鈉0.5～1.5g和瓊脂20.0～30.0g，最后加去離子水定容至1000mL，制得混合液；

2)將混合液于高溫條件下滅菌，然后冷卻，加入氨芐青霉素和鏈霉素，使氨芐青霉素和鏈霉素的終濃度均為20-150μg/mL，混合均勻后立即倒平板，制得牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，所述牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基的pH為5.5-6.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述制備方法制得的牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備若干組牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基備用；

2)菌絲分離培養(yǎng)：采用組織分離法從牛肝菌子實(shí)體上分離出無(wú)菌子實(shí)體組織塊或絲，快速接種于牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基上培養(yǎng)；

3)菌絲純化培養(yǎng)：在步驟2)的培養(yǎng)基上，避開(kāi)雜菌生長(zhǎng)菌落，選取生長(zhǎng)出菌絲的樣品，切取菌絲前端1.0-5.0毫米，然后繼續(xù)接種到新的牛肝菌菌絲可育培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)；

4)菌絲基因測(cè)序：在步驟3)的培養(yǎng)基上，選取純化后的菌絲樣品，利用基因測(cè)序方法鑒定所測(cè)樣品的物種；

5)純化菌絲繼代與培養(yǎng)：取步驟4)鑒定后的牛肝菌菌絲塊接種于牛肝菌菌絲純化培養(yǎng)基，倒置培養(yǎng)；

所述牛肝菌菌絲純化培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：

1)稱(chēng)取150-200g去皮馬鈴薯，加水煮沸20-30分鐘后，紗布過(guò)濾得馬鈴薯浸出液，然后加入葡萄糖15.0～20.0g，白蘿卜汁5～10mL，硝酸銨1.0～2.0g，MgCl₂ 1.0～2.0g，KCl 1.0～2.0g和瓊脂20.0～30.0g，最后加去離子水定容至1000mL，制得混合液；

2）將混合液于高溫條件下滅菌，然后冷卻，加入氨芐青霉素和鏈霉素，使氨芐青霉素和鏈霉素的終濃度均為20-150μg/mL，混合均勻后立即倒平板，制得牛肝菌菌絲純化培養(yǎng)基。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，用于牛肝菌的純化。