[發明專利]一種構建人心肌細胞凋亡模型的方法

在審

• 申請號: 202010160710.6
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111411075A
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 林彬;高強;莊建;岑堅正;麥錦連;周麗詩
• 申請（專利權）人: 廣東源心再生醫學有限公司
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/10
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 許飛

本發明公開了一種構建人心肌細胞凋亡模型的方法。發明人在研究過程中意外發現，一定濃度之上的血管緊張素Ⅱ處理hiPSC?CM一定時間后，可以有效誘導hiPSC?CM凋亡。本發明一些實例，使用血管緊張素Ⅱ誘導人心肌細胞的凋亡，構建與人體更加接近的心肌細胞凋亡模型，為后續的藥理實驗提供有力的工具和方法。

技術領域

本發明涉及一種細胞模型的構建方法，特別涉及一種構建人心肌細胞凋亡模型的方法。

背景技術

心力衰竭是在老年人中非常流行的慢性病，且它的患病率和發病率正逐年上漲。全球接近2600萬人次正在遭受心力衰竭的痛苦，5年內的存活率少于53％。每年全球因慢性心力衰竭治療而造成的經濟負擔超過1080億美元。心力衰竭是很多心血管疾病的末期表現，例如，缺血性心臟病，風濕性心臟病。由于個體差異，使得心力衰竭的治療難以達到滿意的效果。十分迫切建立評估不同藥物對每個心力衰竭病人的效果的方法。

隨著iPS(誘導多能干細胞)技術的發展、心肌細胞分化及純化方法的建立，使得我們可以在體外制備來自患者的心肌細胞。這些心肌細胞已經協助我們研究心血管疾病，(如：長QT間期綜合征，心律不齊，肥厚型心肌病，擴張型心肌病，線粒體心肌病，等)以及進行治療心血管疾病藥物的藥理實驗和心臟毒性試驗(如：醛固酮拮抗劑，血管緊張素轉化酶抑制劑，血管緊張素II受體阻斷劑，β受體阻滯劑，血管緊張素腦啡肽酶受體抑制劑，等)。

建立人心肌細胞凋亡模型的方法對后續的研究十分重要，現有技術一般使用雙氧水(過氧化氫)誘導細胞的凋亡。而過氧化氫并不是正常情況下導致人心力衰竭的原因,應用范圍及其有限。

作為RAS系統(腎素-血管緊張素系統，能調節心血管疾病的病理過程，例如心力衰竭和高血壓)的主要效應因子，血管緊張素II(Angiotensin II)通過激活血管緊張素II受體引起細胞凋亡，細胞肥大和心肌重構。因此，由血管緊張素II誘導的心肌細胞凋亡更加貼合和反映真實情況下的心力衰竭，在心力衰竭的病例機制中扮演著決定性角色。有研究顯示，血管緊張素II可誘導hiPSC(人誘導多能干細胞)和hESC(人胚胎干細胞)來源的心肌細胞肥大，也有報道顯示血管緊張素II的處理組和未處理組的細胞死亡和存活率無顯著性差異。然而，沒有研究表明血管緊張素II可以引起hiPSC-CM(人誘導多能干細胞分化的心肌細胞)凋亡。血管緊張素II受體有兩種類型：AT1和AT2。一般認為，AT1參與血管緊張素II的主要作用，如增殖、肥大和纖維化，而血管緊張素II通過與AT2結合而引起細胞凋亡和心臟重構。對hiPSC-CM的基因表達分析，顯示hiPSC-CM的AT2表達缺失，這可能是導致以前報道的血管緊張素II未能引起hiPSC-CM細胞凋亡的原因。

構建一種能更為有效反應真實心血管的hiPSC-CM細胞凋亡模型，具有非常重要的意義。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種構建可以更為有效反應真實心血管的hiPSC-CM細胞凋亡模型的方法。

本發明所采取的技術方案是：

本發明的第一個方面，提供：

血管緊張素Ⅱ在制備hiPSC分化而來的心肌細胞凋亡誘導劑中的應用。

在一些實例中，血管緊張素Ⅱ的使用終濃度為100μM～1mM。

在一些實例中，血管緊張素Ⅱ的使用終濃度為150μM～1mM。

在一些實例中，血管緊張素Ⅱ的誘導時間不少于6天。

在一些實例中，血管緊張素Ⅱ的誘導時間為6～10天。

血管緊張素Ⅱ的使用終濃度大于100μM時，誘導培養超過6天即可有效誘導hiPSC-CM凋亡。

本發明的第二個方面，提供：