[發明專利]一種絳紅小單孢菌突變型菌株、制備方法以及在硫酸慶大霉素制備中的應用

有效

• 申請號: 202010160277.6
• 申請日: 2020-03-10
• 公開（公告）號: CN111304129B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發明（設計）人: 葛祥斌;徐鵬;楊春敬;葉暉;劉陽;孟曉妍;姜喜元;張文浩
• 申請（專利權）人: 福安藥業集團煙臺只楚藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N13/00;C12P19/48;C12R1/31
• 代理公司: 濟南譽琨知識產權代理事務所(普通合伙) 37278
• 代理人: 晏達峰

1.一種硫酸慶大霉素的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：

1)將絳紅小單孢菌CH20190225-107冷凍管孢子，用滅菌后的1ml吸管吸取0.1ml接種于滅菌后的斜面培養基上進行孢子培養，培養溫度為35～37℃，靜置，培養時間為4天，得到代1孢子斜面，取代1孢子斜面1.0cm²接種于滅菌后的斜面培養基上進行孢子培養，培養溫度為35～37℃，靜置，培養時間為4天，得到代2孢子斜面；

2)將步驟1)中得到的代2孢子斜面，于生物安全柜上，將孢子全部刮下，置于滅菌后的純化水中混合均勻，按照1g孢子加10ml純化水的比例制成孢子懸液，孢子懸液置于一級種子培養基中進行擴大培養，孢子懸液接入量為一級種子培養基體積的千分之一，培養溫度為34～36℃，培養時間為72小時，得到一級種子培養物；

3)將步驟2)得到的一級種子培養物置于滅菌后的二級種子培養基中進行擴大培養，一級種子培養物接入量為二級種子罐培養基體積的20％，培養溫度為34～36℃，培養時間為45小時，得到二級種子培養物；

4)將步驟3)得到的二級種子培養物置于滅菌后的三級種子培養基中進行擴大培養，二級種子培養物接入量為三級種子罐培養基體積的100％，培養溫度為34～36℃，培養時間為20小時，得到三級種子培養物；

5)將步驟4)得到的三級種子培養物置于滅菌后的發酵培養基中進行培養，三級種子培養物接入量為發酵培養基體積的100％，培養溫度為34～36℃，發酵培養20小時后開始補入滅菌后的732樹脂，732樹脂補入量為發酵液體積的7％，培養時間為200～250小時，得到慶大霉素發酵產物；

6)將步驟5)得到的慶大霉素發酵產物進行過篩處理，得到吸附慶大霉素的732飽和樹脂；

7)將步驟6)得到的慶大霉素飽和樹脂上柱去除Ca²⁺、Mg²⁺、Cl^-，以質量濃度4.5％的氨水進行解析，解析液進行超濾脫色，得到去除離子和脫色的慶大霉素溶液；

8)將步驟7)得到的去除離子和脫色的慶大霉素溶液進行納濾濃縮和薄膜濃縮，得到慶大霉素濃縮液；

9)得到的慶大霉素濃縮液加入硫酸溶液后制得硫酸慶大霉素；

10)將步驟9)得到硫酸慶大霉素通過噴霧干燥制得硫酸慶大霉素成品；

步驟1)中，絳紅小單孢菌(Micromonospora purpurea)CH20190225-107，已于2019年12月30日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCCNO.19254；

步驟1)中，以重量百分比計，所述斜面培養基的配方為：可溶性淀粉1.2％，葡萄糖0.6％，碳酸鈣0.06％，酵母浸出粉0.25％，瓊脂1.8％，余量為水；配制好的斜面培養基分裝于250ml茄子瓶中，每個茄子瓶分裝60ml，經濕熱滅菌后，斜放凝固，濕熱滅菌條件為0.11MPa，121℃，30分鐘；

步驟2)中，以重量百分比計，所述一級種子培養基的配方為：淀粉3.0％，豆粉2.0％，硫酸亞鐵0.0005％，氯化鈷0.0003％，碳酸鈣0.3％，消泡劑0.03％，余量為水；

步驟3)中，以重量百分比計，所述二級種子培養基的配方為：淀粉5.5％，玉米蛋白粉2.0％，豆粉3.5％，硫酸亞鐵0.001％，氯化鈷0.0004％，碳酸鈣0.4％，消泡劑0.04％，余量為水；

步驟4)中，以重量百分比計，所述三級種子培養基的配方為：淀粉5.5％，玉米蛋白粉2.0％，豆粉3.5％，硫酸亞鐵0.001％，氯化鈷0.0004％，碳酸鈣0.4％，消泡劑0.04％，余量為水；

步驟5)中，以重量百分比計，所述發酵培養基的配方為：淀粉7.5％，玉米蛋白粉3.5％，豆粉5.0％，硫酸亞鐵0.0015％，氯化鈷0.0008％，碳酸鈣0.45％，消泡劑0.06％，余量為水；所用的732樹脂為001×7強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟10)中，噴霧干燥的條件為進風溫度120～140℃，出風溫度85℃，噴速80～120L/h。