[發明專利]特異性轉變靶向DNA序列的核酸堿基的基因組序列的修飾方法、及其使用的分子復合體

在審

• 申請號: 202010159184.1
• 申請日: 2015-03-04
• 公開（公告）號: CN111500570A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 西田敬二;近藤昭彥;小嶋聰美
• 申請（專利權）人: 國立大學法人神戶大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12N9/78;C12N9/22;C12N15/55
• 代理公司: 北京林達劉知識產權代理事務所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種修飾雙鏈DNA的靶向位點的非疾病治療目的的方法，其包括：使由核酸堿基轉變酶、和與選擇的雙鏈DNA中的靶核苷酸序列進行特異性結合的核酸序列識別模塊連接而成的復合體，與該雙鏈DNA接觸，不切割該靶向位點中的該雙鏈DNA的至少一條鏈，而使該靶向位點的1個以上的核苷酸缺失或轉變為其它的1個以上的核苷酸，或者向該靶向位點插入1個以上的核苷酸的工序。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，所述核酸序列識別模塊選自由Cas的至少1種DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系統、鋅指基序、TAL效應子及PPR基序組成的組。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述核酸序列識別模塊為Cas的至少1種DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系統。

4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其中，使用與不同的靶核苷酸序列分別進行特異性結合的兩種以上的核酸序列識別模塊。

5.根據權利要求4所述的方法，其中，所述不同的靶核苷酸序列存在于不同的基因內。

6.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，所述核酸堿基轉變酶為脫氨酶。

7.根據權利要求6所述的方法，其中，所述脫氨酶為AID(AICDA)。

8.根據權利要求1-3中任一項所述的方法，其中，雙鏈DNA與復合體的接觸，通過向具有所述雙鏈DNA的細胞中導入編碼所述復合體的核酸來進行。

9.根據權利要求8所述的方法，其中，所述細胞是原核生物細胞。

10.根據權利要求8所述的方法，其中，所述細胞是真核生物細胞。

11.根據權利要求8所述的方法，其中，所述細胞是微生物細胞。

12.根據權利要求8所述的方法，其中，所述細胞是植物細胞。

13.根據權利要求8所述的方法，其中，所述細胞是昆蟲細胞。

14.根據權利要求8所述的方法，其中，所述細胞是動物細胞。

15.根據權利要求8所述的方法，其中，所述細胞是脊椎動物細胞。

16.根據權利要求8所述的方法，其中，所述細胞是哺乳動物細胞。

17.根據權利要求9所述的方法，其中，所述細胞為多倍體細胞，并且對同源染色體上的全部靶向化的等位基因內的位點進行修飾。

18.根據權利要求8所述的方法，其包括：將以能夠控制表達時期的形式包含編碼所述復合體的核酸的表達載體，導入所述細胞的工序，以及在需要使雙鏈DNA的靶向位點的修飾穩定的時期，誘導該核酸的表達的步驟。

19.根據權利要求18所述的方法，其中，雙鏈DNA中的靶核苷酸序列存在于對于所述細胞必需的基因內。

20.核酸修飾酶復合體，該復合體由與雙鏈DNA中的靶核苷酸序列特異性結合的核酸序列識別模塊，和核酸堿基轉變酶連接而成，在靶向位點中，不切割該雙鏈DNA的至少一條鏈，使該靶向位點的1個以上的核苷酸缺失或轉變為其它的1個以上的核苷酸，或者向該靶向位點插入1個以上的核苷酸。

21.編碼權利要求20所述的核酸修飾酶復合體的核酸。