[發(fā)明專利]特異性轉(zhuǎn)變靶向DNA序列的核酸堿基的基因組序列的修飾方法、及其使用的分子復(fù)合體

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010159183.7
• 申請(qǐng)日: 2015-03-04
• 公開（公告）號(hào): CN111500569A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 西田敬二;近藤昭彥;小嶋聰美
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國立大學(xué)法人神戶大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12N9/78;C12N9/22;C12N15/55
• 代理公司: 北京林達(dá)劉知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種修飾雙鏈DNA的靶向位點(diǎn)的非疾病治療目的的方法，其包括：使由核酸堿基轉(zhuǎn)變酶、和與選擇的雙鏈DNA中的靶核苷酸序列進(jìn)行特異性結(jié)合的核酸序列識(shí)別模塊連接而成的復(fù)合體，與該雙鏈DNA接觸，不切割該靶向位點(diǎn)中的該雙鏈DNA的至少一條鏈，而使該靶向位點(diǎn)的1個(gè)以上的核苷酸缺失或轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌?個(gè)以上的核苷酸，或者向該靶向位點(diǎn)插入1個(gè)以上的核苷酸的工序。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述核酸序列識(shí)別模塊選自由Cas的至少1種DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系統(tǒng)、鋅指基序、TAL效應(yīng)子及PPR基序組成的組。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述核酸序列識(shí)別模塊為Cas的至少1種DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系統(tǒng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的方法，其中，使用與不同的靶核苷酸序列分別進(jìn)行特異性結(jié)合的兩種以上的核酸序列識(shí)別模塊。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述不同的靶核苷酸序列存在于不同的基因內(nèi)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述核酸堿基轉(zhuǎn)變酶為脫氨酶。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中，所述脫氨酶為AID(AICDA)。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，雙鏈DNA與復(fù)合體的接觸，通過向具有所述雙鏈DNA的細(xì)胞中導(dǎo)入編碼所述復(fù)合體的核酸來進(jìn)行。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述細(xì)胞是原核生物細(xì)胞。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述細(xì)胞是真核生物細(xì)胞。

11.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述細(xì)胞是微生物細(xì)胞。

12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述細(xì)胞是植物細(xì)胞。

13.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述細(xì)胞是昆蟲細(xì)胞。

14.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述細(xì)胞是動(dòng)物細(xì)胞。

15.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述細(xì)胞是脊椎動(dòng)物細(xì)胞。

16.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

17.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述細(xì)胞為多倍體細(xì)胞，并且對(duì)同源染色體上的全部靶向化的等位基因內(nèi)的位點(diǎn)進(jìn)行修飾。

18.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其包括：將以能夠控制表達(dá)時(shí)期的形式包含編碼所述復(fù)合體的核酸的表達(dá)載體，導(dǎo)入所述細(xì)胞的工序，以及在需要使雙鏈DNA的靶向位點(diǎn)的修飾穩(wěn)定的時(shí)期，誘導(dǎo)該核酸的表達(dá)的步驟。

19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，其中，雙鏈DNA中的靶核苷酸序列存在于對(duì)于所述細(xì)胞必需的基因內(nèi)。

20.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述核酸序列識(shí)別模塊為Cas的僅1種DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系統(tǒng)。

21.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其中，所述核酸序列識(shí)別模塊為Cas的2種DNA切割能力失活的CRISPR-Cas系統(tǒng)。