[發明專利]橡膠樹炭疽病病原菌暹羅炭疽菌的快速分子檢測方法與應用

在審

• 申請號: 202010159103.8
• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號: CN111321242A
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 劉先寶;李博勛;黃貴修;鄭肖蘭;蔡吉苗;江濤;馮艷麗
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院環境與植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 北京惟誠致遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11536
• 代理人: 王慧鳳;李巍

1.鑒定橡膠樹炭疽病病原菌暹羅炭疽菌(Colletotrichum siamense)的專用引物，是由序列1和序列2組成的引物對。

2.權利要求1所述的專用引物在鑒定橡膠樹炭疽病病原菌暹羅炭疽菌(Coletotrichumsiamense)中的應用。

3.一種鑒定橡膠樹炭疽病病原菌暹羅炭疽菌(Coletotrichum siamense)的方法，包括下述步驟：

(1)以待測樣品DNA為模板，用權利要求1所述的引物進行PCR擴增；

(2)鑒定步驟(1)所述的PCR擴增產物的大小，將擴增產物中含有一個416bp的DNA特異性擴增片段的待測樣品鑒定為暹羅炭疽菌(Coletotrichum siamense)。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述PCR擴增的反應體系為25μL，包括：待測樣品DNA，上游正向引物和下游反向引物的濃度均為0.4μmoll^-1，dNTP 0.2μmoll^-1,2.5μL含15mM MgCL₂的10×PCR緩沖液；Taq DNA聚合酶添加終濃度為0.04U/μL，加雙蒸水補足到25μL。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，PCR反應程序為：95℃預變性3min；94℃變性30s，66℃退火30s,72℃延伸45s，30個循環；72℃延伸5min。

6.一種鑒定橡膠樹炭疽病病原菌暹羅炭疽菌(Colletotrichum siamense)的試劑盒，包括權利要求1所述的鑒定橡膠樹炭疽病病原菌暹羅炭疽菌(Colletotrichum siamense)的專用引物。

7.根據權利要求6所示的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中還包括PCR反應試劑。