[發明專利]一種重組人成纖維細胞生長因子-21包涵體的純化工藝

在審

• 申請號: 202010158981.8
• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號: CN111620943A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 鄭詩雨;馬金航;張銘浩;惠琦;何鑫
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: C07K14/50
• 分類號: C07K14/50;C07K1/113;C07K1/18;C07K1/14
• 代理公司: 杭州知閑專利代理事務所(特殊普通合伙) 33315
• 代理人: 張勛斌

1.一種重組人成纖維細胞生長因子-21包涵體的純化工藝，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將菌體懸浮于粗提工作液中，加入溶菌酶進行攪拌和超聲破碎，然后進行離心、洗滌沉淀得到包涵體；

(2)將步驟(1)得到的包涵體溶解于變性溶液中得到包涵體溶液，然后將復性溶液加入包涵體溶液，攪拌均勻，得到復性后的包涵體溶液；

(3)步驟(2)得到包涵體溶液采用Q Sepharose Fast Flow陰離子交換柱進行分離，得到蛋白溶液；

分離時，以25mmol/L Tris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素作為緩沖液，以25mmol/L Tris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素、0.05mol/L NaCl作為洗雜液，以25mmol/L Tris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素、0.1mol/L NaCl作為洗脫液，以25mmol/L Tris-HCl(pH7.8)、1mol/L NaCl作為再生液；

(4)步驟(3)得到的蛋白溶液采用Q Sepharose Fast Flow陰離子交換柱進行濃縮，得到重組人成纖維細胞生長因子-21；

濃縮時，以25mmol/L Tris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L尿素作為層析的上樣緩沖液，25mmol/L Tris-HCl(pH7.8)、1.0mol/L NaCl作為洗脫液。

2.根據權利要求1所述的重組人成纖維細胞生長因子-21包涵體的純化工藝，其特征在于，步驟(1)中，所述的粗提工作液為25mmol/L Tris-HCl(pH8.0)緩沖溶液，并含有150mmol/L NaCl、2mmol/L EDTA-2Na和0.5％triton。

3.根據權利要求1所述的重組人成纖維細胞生長因子-21包涵體的純化工藝，其特征在于，步驟(1)中，洗滌時分別采用1％的脫氧膽酸鈉和1％Triton X-100溶液。

4.根據權利要求1所述的重組人成纖維細胞生長因子-21包涵體的純化工藝，其特征在于，步驟(2)中，所述的變性溶液為8mol/L尿素，包涵體與變性溶液的用量比為1:10(W:V)。

5.根據權利要求1所述的重組人成纖維細胞生長因子-21包涵體的純化工藝，其特征在于，步驟(2)中，所述的復性溶液為25mmol/L Tris(pH7.8)溶液，包涵體與復性溶液的用量比為1:70(W:V)。

6.根據權利要求1所述的重組人成纖維細胞生長因子-21包涵體的純化工藝，其特征在于，步驟(3)中，經過兩次柱層析進行分離，第一次柱層析完成后，經過透析除鹽后再進行第二次柱層析。