[發明專利]結核分枝桿菌H37Rv新基因Rv0229A及其編碼蛋白和應用

在審

• 申請號: 202010156921.2
• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號: CN113373162A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 徐平;張瑤;王紅;戴二黑;武舒佳;常蕾;高慧英
• 申請（專利權）人: 北京蛋白質組研究中心
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C07K14/35;C12Q1/689;C12Q1/04;C12N15/11;G01N33/569;G01N33/68;A61K39/04;A61P31/04;C12R1/32
• 代理公司: 北京律誠同業知識產權代理有限公司 11006
• 代理人: 黃韌敏

本發明涉及一種結核分枝桿菌H37Rv新編碼基因Rv0229A(?|274710?274904|)及其編碼蛋白。Rv0229A所編碼蛋白部分或者全部具有B細胞抗原性，可單獨或者聯合用于肺結核患者的臨床快速篩查和保護人體免受結核分枝桿菌感染。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及結核分枝桿菌的新基因和應用。

背景技術

結核病是一個全球性的重大公共衛生問題，結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis，MTB)是引起人類結核病的病原菌。據WHO最新發布的2019年全球結核病報告數據顯示，2018年新增約1000萬新發活動性肺結核患者，結核病仍然是感染性疾病中的頭號殺手。除了活躍的結核病患者外，世界上約有1/4 人口感染了MTB，面臨著進一步發展為活動性結核病的風險。故建立快速、準確、特異、敏感、廉價的結核病檢測方法，是有效治療、控制結核病蔓延的必要前提。

目前結核病的診斷主要依賴1)痰液細菌學檢查及胸片影像學檢查，但是存在敏感性低或耗時長的缺點；2)免疫學診斷法，但因與BCG疫苗或其它環境分枝桿菌產生交叉免疫反應，從而導致了高假陽性的產生，尤其是BCG疫苗接種區尤為明顯。至今國內外已有多個類似于T-SPOT.TB的試劑盒或依托蛋白質芯片免疫診斷輔助技術的試劑盒，但均由于缺乏可鑒別結核分枝桿菌有效特異性新抗原這一核心難題，難于解決“陽性不能確證，陰性難于排除”的難題。因此結核分枝桿菌特異性高效抗原的開發是業界亟待解決的核心難題，任何進步都將為結核病臨床診斷技術的發展和試劑盒的研制提供原始創新性成果和技術支撐。

發明內容

本發明的目的是提供一種結核分枝桿菌H37Rv漏注釋基因 Rv0229A(-|274710-274904|)。

本發明的第二個目的是提供上述基因編碼的蛋白產物。

本發明的第三個目的是提供一種結核分枝桿菌IgG抗體檢測抗原。

本發明的第四個目的是提供一種結核分枝桿菌檢測試劑。

本發明的第五個目的是提供一種結核分枝桿菌抗原。

本發明的第六個目的是提供上述結核分枝桿菌IgG抗體檢測抗原和結核分枝桿菌抗原的應用。

根據本發明的一方面，一種分離的核苷酸，為結核分枝桿菌H37Rv編碼基因Rv0229A(-|274710-274904|)，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

通過精準蛋白質基因組學技術，鑒定到其編碼基因表達產物的一條高質量肽段“TELGTTTIKDTVNAALR”(圖1)。通過人工合成該肽段，液相色譜-質譜聯用分析，原始譜圖與合成肽段譜圖基本一致(圖2)，驗證了蛋白質基因組學發現新肽段正確。據此確定了新基因Rv0229A(-|274710-274904|)在染色體上的位置，其所編碼蛋白經NCBI-BLASTP后，數據庫中沒有比對到任何序列，屬于功能未知新基因編碼蛋白。

Bepipred Linear Epitope Prediction(BLEP，v2.0)、BioSun和Dlbepitope軟件分別預測到2、6和1個高分值B細胞表位，其中至少兩種預測軟件預測為可信的B細胞表位，覆蓋了整個蛋白質序列的76.56％(表1)，意味著其可能具有B 細胞抗原性，其蛋白序列如SEQ ID NO.2所示。

表1.Rv0229A理論預測的高可信表位

根據本發明的又一方面，一種Rv0229A編碼蛋白，由上述結核分枝桿菌H37Rv編碼基因Rv0229A(-|274710-274904|)編碼，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2 所示。