[發(fā)明專利]一種基于SDDA-UHPLC-MS/MS的擬靶向代謝組學分析方法

在審

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• 申請日: 2020-03-09
• 公開（公告）號: CN111398444A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發(fā)明（設計）人: 周婷;楊吉娜
• 申請（專利權(quán)）人: 華南理工大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 廣州駿思知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44425
• 代理人: 吳靜芝

本發(fā)明涉及一種基于SDDA?UHPLC?MS/MS的擬靶向代謝組學分析方法，包括以下步驟：S1、制備質(zhì)量控制QC樣本，選出最優(yōu)的質(zhì)量軸分段方案；S2、對最佳質(zhì)量軸分段方案下的分段數(shù)據(jù)依賴型采集?超高效液相色譜?高分辨率質(zhì)譜色譜圖進行二級質(zhì)譜去卷積處理；S3、構(gòu)建候選離子對；S4、匯總整理不同質(zhì)量范圍的候選離子對；S5、驗證候選離子對；S6、基于SDDA?UHPLC?MS/MS的擬靶向分析方法的建立；S7、對上一步驟的分析方法進行驗證；S8、使用基于SDDA?UHPLC?MS/MS的擬靶向分析方法檢測待分析樣品，并進行代謝組學數(shù)據(jù)挖掘。本發(fā)明所述分析方法保證了檢測離子擁有充足的掃描時間，提高了對共洗脫離子的檢測，能將分析物檢測覆蓋率擴大一倍，且靈敏度高、重復性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及化學分析領(lǐng)域，尤其涉及一種基于SDDA-UHPLC-MS/MS的擬靶向代謝組學分析方法。

背景技術(shù)

代謝組學是研究生物體內(nèi)所有內(nèi)源性代謝物及其變化與生理病理的相對關(guān)系的科學。代謝組學通常分為非靶向分析、靶向分析和擬靶向分析。非靶向分析借助高分辨率質(zhì)譜可獲得無偏倚的全掃描信息和準確分子量，然而存在線性范圍窄、重復性差、數(shù)據(jù)處理復雜的問題。靶向分析通常采用多反應監(jiān)測(multiple reaction monitoring,MRM)模式進行檢測，具備動態(tài)線性范圍寬、重復性好的優(yōu)點，而且分析對象為已知物質(zhì)，無需色譜峰對齊等復雜的數(shù)據(jù)處理；但是，靶向分析需要用標準品確定代謝物的離子對信息，導致其化合物覆蓋范圍窄、通量低。融合了非靶向分析和靶向分析的優(yōu)勢，擬靶向分析通過用高分辨率質(zhì)譜檢測實際樣品以獲得二級質(zhì)譜，根據(jù)二級質(zhì)譜建立代謝物離子對的MRM通道，再用三重四極桿質(zhì)譜的MRM模式檢測樣品，故而兼具靈敏度高、精密度高、線性范圍寬等優(yōu)點。同時，擬靶向分析打破了傳統(tǒng)定量分析需要用標準品確定離子對信息的限制，極大限度緩解了因缺乏標準品無法定量的困難。

數(shù)據(jù)依賴型采集(data dependent acquisition,DDA)是代謝組學分析中質(zhì)譜儀常用的采集模式。DDA模式能夠在一個掃描循環(huán)中獲得多個化合物的二級質(zhì)譜數(shù)據(jù)，展現(xiàn)出良好的離子歸屬能力，因此DDA模式非常適合需要建立離子對的擬靶向分析。然而，在遇到共洗脫現(xiàn)象時，由于洗脫物質(zhì)過多，基于DDA的擬靶向分析或無法有效地建立所有分析物的離子對，造成大量離子漏檢。質(zhì)量軸分段策略可以有效地增加每個離子的掃描時間，提高對共洗脫離子的檢測性能。傳統(tǒng)檢測方法的質(zhì)量范圍大約在100-1000m/z，而質(zhì)譜儀的掃描速度有限，過寬的質(zhì)量范圍導致每個m/z的掃描時間很短暫，容易導致漏檢。但是質(zhì)量軸分段策略縮短了質(zhì)量范圍，保證每個離子擁有充足的掃描時間，使檢測信號更加穩(wěn)定、結(jié)果更加可靠。分段數(shù)據(jù)依賴型采集(segment data dependent acquisition,SDDA)模式可以延長每個離子的掃描時間，有望提高共洗脫物質(zhì)的檢測。故而，一種基于SDDA-UHPLC-MS/MS(segment data dependent acquisition-ultra high performance liquidchromatography-tandem mass spectrometry,SDDA-UHPLC-MS/MS)的擬靶向代謝組學分析方法的建立，對拓寬擬靶向分析物質(zhì)檢測范圍具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了擴寬擬靶向分析的化合物覆蓋范圍，本發(fā)明提供一種基于SDDA-UHPLC-MS/MS的擬靶向代謝組學分析方法。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

一種基于SDDA-UHPLC-MS/MS(分段數(shù)據(jù)依賴型采集-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，segment data dependent acquisition-ultra high performance liquidchromatography-tandemmass spectrometry,SDDA-UHPLC-MS/MS)的擬靶向代謝組學分析方法，包括以下步驟：