[發(fā)明專利]癌癥診斷和病程監(jiān)控方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010156417.2
• 申請(qǐng)日: 2020-03-10
• 公開（公告）號(hào): CN111996249A
• 公開（公告）日: 2020-11-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王弢;巴兆粉;丁鳳英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州普瑞邁德醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司;江蘇為真生物醫(yī)藥技術(shù)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種或多種腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因作為檢測(cè)靶點(diǎn)在制備用于泛癌的診斷或病程監(jiān)控的試劑盒中的用途，所述試劑盒對(duì)受試者的體液外泌體中一種或多種腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)，其特征在于：所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因包括EGF、TGF-β1、VEGFB、MMP9、CXCL8、CXCL12或其組合，優(yōu)選地，包括EGF/VEGFB的組合。

2.一種或多種腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的外泌體mRNA的檢測(cè)試劑在制備用于泛癌的診斷或病程監(jiān)控的試劑盒中的用途，所述檢測(cè)試劑對(duì)受試者的體液外泌體中一種或多種腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的mRNA水平進(jìn)行檢測(cè)，其特征在于：所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因包括EGF、TGF-β1、VEGFB、MMP9、CXCL8、CXCL12或其組合，優(yōu)選地，包括EGF/VEGFB的組合。

3.如權(quán)利要求1或2所述的用途，其中與來自不具有癌癥的個(gè)體的對(duì)照水平相比，受試者的體液外泌體中EGF、TGF-β1、MMP9、CXCL8或CXCL12的mRNA的水平上升指示所述受試者具有患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)；或受試者的體液外泌體中VEGFB的mRNA的水平下降指示所述受試者具有患癌癥的風(fēng)險(xiǎn)。

4.如權(quán)利要求1或2所述的用途，其中試劑盒或檢測(cè)試劑通過選自常規(guī)RT-PCR檢測(cè)、ddPCR檢測(cè)、基于高通量測(cè)序的檢測(cè)和基因芯片檢測(cè)等方法檢測(cè)所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的mRNA水平。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其中RT-PCR檢測(cè)、ddPCR檢測(cè)、基于高通量測(cè)序的檢測(cè)和基因芯片檢測(cè)方法中，逆轉(zhuǎn)錄和PCR可以分別進(jìn)行或在一步法PCR反應(yīng)或一步法多重PCR反應(yīng)中完成；

其中所述基于高通量測(cè)序的檢測(cè)包括：

a1. 使用所述外泌體RNA，通過轉(zhuǎn)錄組建庫；和

a2. 對(duì)獲得的全轉(zhuǎn)錄組文庫進(jìn)行測(cè)序以獲得所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的mRNA水平；

或其中所述基于高通量測(cè)序的檢測(cè)包括：

b1. 使用所述外泌體RNA作為模板，和隨機(jī)引物或所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因和內(nèi)參基因的特異性引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄；

b2. 使用所述逆轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物作為模板，和所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增引物進(jìn)行多重PCR；

b3. 使用所述多重PCR的產(chǎn)物進(jìn)行建庫；和

b4. 對(duì)建立的文庫進(jìn)行測(cè)序以獲得所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的mRNA水平；

其中所述基因芯片檢測(cè)包括：

c1. 使用所述外泌體RNA作為模板，和隨機(jī)引物或所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因和內(nèi)參基因的特異性引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄；

c2. 使用所述逆轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物作為模板，和所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因和內(nèi)參基因的擴(kuò)增引物進(jìn)行多重PCR；和

c3. 將所述多重PCR的產(chǎn)物與基因芯片進(jìn)行雜交，從而獲得所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的mRNA水平，

其中所述基因芯片包含所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因和內(nèi)參基因的特異性探針;

或其中所述基因芯片檢測(cè)包括：

d1. 使用所述外泌體RNA，通過轉(zhuǎn)錄組建庫；和

d2. 將建立的全轉(zhuǎn)錄組文庫與基因芯片進(jìn)行雜交從而獲得所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的mRNA水平，

其中所述基因芯片包含所述腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因和內(nèi)參基因的特異性探針。

6.如權(quán)利要求1或2所述的用途，其中病程監(jiān)控包括比較第一時(shí)間點(diǎn)與第二時(shí)間點(diǎn)或多個(gè)其它時(shí)間點(diǎn)所述患者的體液外泌體中一種或多種腫瘤微環(huán)境相關(guān)基因的mRNA水平的步驟，其中所述第二時(shí)間點(diǎn)或多個(gè)其它時(shí)間點(diǎn)在所述第一時(shí)間點(diǎn)之后；進(jìn)一步優(yōu)選地：相比于所述第一時(shí)間點(diǎn)，在所述第二時(shí)間點(diǎn)所述患者的體液外泌體中EGF、TGF-β、MMP9、CXCL8、CXCL12的mRNA的水平下降指示預(yù)后良好，或在所述第二時(shí)間點(diǎn)所述患者的體液外泌體中VEGFB的mRNA的水平上升指示預(yù)后良好。

7.如權(quán)利要求6所述的用途，其中所述患者在所述第一時(shí)間點(diǎn)和第二時(shí)間點(diǎn)之間接受癌癥治療，所述癌癥治療選自化學(xué)療法、放射療法、免疫療法、手術(shù)治療，或其組合。