[發明專利]一種用于高密度培養山羊支原體山羊肺炎亞種的培養基及其發酵培養方法

在審

• 申請號: 202010156379.0
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN111172083A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 宋青龍;薛新升
• 申請（專利權）人: 北京龍科方舟生物工程技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/35
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種用于高密度培養山羊支原體山羊肺炎亞種的培養基及其發酵培養方法。所述山羊支原體山羊肺炎亞種由臨床診斷為患支原體性肺炎的山羊呼吸道分泌物中分離得到，已于2019年12月4日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC No.18878。所述發酵培養方法為將經過復蘇傳代后的山羊支原體山羊肺炎亞種ZFY17 CGMCC No.18878在特定發酵培養基及特定條件下進行液體發酵培養。所述特定發酵培養基采用葡萄糖、水解酵母蛋白、水解酵母培養物、水解乳蛋白、酪蛋白的組合替代部分馬血清，大大降低了菌株發酵成本。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種用于高密度培養山羊支原體山羊肺炎亞種的培養基及其發酵培養方法。

背景技術

山羊傳染性胸膜肺炎是山羊養殖中常見的急性或慢性高度接觸性呼吸道傳染病，以纖維素性胸膜炎為主要特征，被感染羊群無年齡和性別差異，發病率和死亡率都很高。現廣泛流行于非洲和亞洲養羊國家，危害極大，被世界動物衛生組織(OIE)列為必須報告的動物傳染病之一，1873年首次發現于阿爾及利亞，迄今為止全球已有40多個國家和地區曾有該病發生的報道，我國于2010年首次向OIE通報此病，該病每年都會造成巨大的經濟損失。山羊傳染性胸膜肺炎是由山羊支原體山羊肺炎亞種(Mycoplasmacapricolumsubsp.Capripneumonia，Mccp)引起，由于臨床上支原體的分離與培養十分困難，非專業實驗室無法做到，且臨床上又常可能被其它呼吸道疾病干擾而最終不能確認，致使羊場技術人員及基層獸醫基本上只能憑經驗用藥，而無法針對病原支原體進行科學合理用藥。

山羊傳染性胸膜肺炎病原的分離與鑒定是一個難題，到目前為止，分離到病原是證實山羊傳染性胸膜肺炎發生的唯一辦法。然而分離山羊支原體肺炎亞種是一個漫長而艱難的過程，進行體外培養也較難，其對營養要求和培養條件比較苛刻，在很大程度上阻礙了對其的分離培養。除此之外，山羊支原體山羊肺炎亞種的基因組很小，其生物合成能力較低，生長需要外源性膽固醇、核酸前體、維生素等等，要想找到既便宜又能高密度培養該支原體的培養基組成需要很大的工作量去嘗試、去篩選。因此，選擇適宜的培養基及發酵條件是亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種既便宜又能高密度培養山羊支原體山羊肺炎亞種的培養基及其發酵培養方法。

為了實現上述目的，本發明首先提供了一種用于培養山羊支原體山羊肺炎亞種的培養基。

本發明提供的用于培養山羊支原體山羊肺炎亞種的培養基為如下1)或2)或3)：

1)所述培養基的溶質包括滅活馬血清、25％(質量分數)酵母浸液、10％(質量分數)醋酸鉈、青霉素、酚紅、PPLO肉湯、丙酮酸鈉和葡萄糖；

2)所述培養基的溶質包括滅活馬血清、25％(質量分數)酵母浸液、10％(質量分數)醋酸鉈、青霉素、酚紅、PPLO肉湯、丙酮酸鈉、葡萄糖和水解乳蛋白；

3)所述培養基的溶質包括滅活馬血清、25％(質量分數)酵母浸液、10％(質量分數)醋酸鉈、青霉素、酚紅、PPLO肉湯、丙酮酸鈉、葡萄糖、水解乳蛋白、水解酵母蛋白、水解酵母培養物和酪蛋白。

上述1)中所述的用于培養山羊支原體山羊肺炎亞種的培養基中，

所述滅活馬血清在所述培養基中的體積分數可為8-20％；進一步的，所述滅活馬血清在所述培養基中的體積分數可為8-10％或10-20％；更進一步的，所述滅活馬血清在所述培養基中的體積分數可為8％或10％或20％。

所述25％酵母浸液在所述培養基中的體積分數可為8-12％；進一步的，所述25％酵母浸液在所述培養基中的體積分數可為8-10％或10-12％；更進一步的，所述25％酵母浸液在所述培養基中的體積分數可為8％或10％或12％。