[發明專利]一種三疣梭子蟹耐鹽堿的分子標記C0及其應用

有效

• 申請號: 202010154929.5
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN111286545B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 呂建建;張文;閻德平;劉萍;李健
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院黃海水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

本發明提供了一種三疣梭子蟹耐鹽堿的分子標記C0及其應用。所述分子標記C0的的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，而用于檢測該分子標記C0的引物對的核苷酸序列分別如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所示。所述的分子標記C0為SNP標記，其耐堿基因型為AG基因型。本發明提供的分子標記C0可以不受三疣梭子蟹生長階段的限制，明顯加快三疣梭子蟹的選育進程以及快速選育出具備耐受鹽堿的優良性狀的蟹種，并且使用該分子標記C0檢測三疣梭子蟹耐鹽堿的性狀準確可靠且操作簡單，有利于梭子蟹的健康養殖與發展，因此具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明屬于水產動物DNA分子標記的技術領域，具體涉及一種三疣梭子蟹耐鹽堿的分子標記C0及其應用。

背景技術

三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)屬甲殼綱、十足目、梭子蟹科，俗稱梭子蟹，是我國重要的大型海洋經濟蟹類。梭子蟹肉質鮮美、營養豐富，深受消費者喜愛。鹽堿水域是一種世界性的低產水資源，僅中國就有4587萬hm2鹽堿水域，由于具有高鹽度、高堿度、高pH以及復雜離子組成等特點，一般常規的水產動物無法在其中正常生存繁殖，很大程度上阻礙了該類水資源的開發利用。三疣梭子蟹在高鹽堿刺激下會對其生理生化造成一定的影響，而且高鹽堿會使幼蟹的攝食率、變態率和存活率下降。因此，耐鹽堿性狀是三疣梭子蟹重要的育種性狀之一，對于提高梭子蟹的養成率及促進其在鹽堿地的養殖推廣具重要意義。然而，耐鹽堿性狀具明顯的低遺傳力特征，通過傳統的育種方法遺傳進展緩慢，迫切需要借助先進的分子標記輔助育種技術以加快選育進程，而耐鹽堿分子標記的鑒定及創新應用是開展分子標記輔助育種的必要前提和途徑。

目前有關三疣梭子蟹耐鹽堿的分子標記開發的研究較少，并且產業中缺乏可應用于分子標記輔助育種的標記。因此，開發耐鹽堿性狀相關分子標記對梭子蟹的健康養殖及選育具有重要的意義。

發明內容

本發明提供了一種三疣梭子蟹耐鹽堿的分子標記C0及其應用，本發明利用測序數據的多態性位點過濾及比對分析、PCR測序的方法，得到SNP和InDel 標記，再經過對標記的逐步篩選和驗證，最終獲得一個新的三疣梭子蟹耐鹽堿的分子標記C0，該分子標記有利于三疣梭子蟹耐受鹽堿性狀的選育。

為實現上述發明目的，本發明采用以下技術方案予以實現：

本發明提供了一種三疣梭子蟹耐鹽堿的分子標記C0，所述分子標記C0的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

進一步的，所述分子標記C0為SNP標記。

進一步的，所述分子標記C0的鹽堿耐受基因型為AG基因型。

本發明還提供了用于檢測權利要求1所述的分子標記C0的引物對，所述引物中的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，反向引物的核苷酸序列如 SEQ IDNo.3所示。

本發明還提供了所述的分子標記C0在篩選三疣梭子蟹耐受鹽堿性狀品種中的應用。

進一步的：所述應用步驟為：提取三疣梭子蟹待測試樣品的DNA并將其作為模板，使用分子標記C0的擴增引物進行PCR擴增，并將PCR產物進行測序，如果測序結果中分子標記的基因型為AG，則待測試樣品選擇作為培育三疣梭子蟹耐鹽堿品種的親本。

進一步的：所述PCR擴增體系為：模板1μl，正向引物(10μM)0.2μl，反向引物(10μM)0.2μl，Buffer緩沖液1μl，dNTPs 0.8μl，HiFi 0.2μl，ddH₂O6.6μl。

進一步的：所述PCR擴增的程序為：預變性94℃2-5min；變性94℃30s，退火55℃30s，延伸72℃1-2kb/min，共重復35個循環；最后延伸72℃5-10min。

本發明還提供了所述的分子標記C0在三疣梭子蟹遺傳多樣性分析、種質鑒定和遺傳圖譜構建中的應用。