[發明專利]一種用于檢測新型冠狀病毒的單克隆抗體及其制備試劑盒的用途

有效

• 申請號: 202010154392.2
• 申請日: 2020-03-07
• 公開（公告）號: CN111269313B
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發明（設計）人: 彭菲;陳印平
• 申請（專利權）人: 北京舜景生物醫藥技術有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;C12N15/40;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 深圳市恒程創新知識產權代理有限公司 44542
• 代理人: 趙愛蓉

本發明涉及一種用于檢測新型冠狀病毒的單克隆抗體及其制備試劑盒的用途。N蛋白是冠狀病毒重要的標志蛋白，檢測N蛋白能夠實現冠狀病毒的檢測。本發明得到的抗N蛋白單克隆抗體具有特異性高，可大量生產的特點，所得抗體的效價較高。本發明所得到的抗N蛋白單克隆抗體能夠特異性的結合N蛋白，可用于細胞的免疫學檢測，具有廣闊的市場前景，具有重要的臨床意義。

技術領域

本發明屬于生物檢測領域，具體涉及一種用于檢測新型冠狀病毒的單克隆抗體及其制備試劑盒的用途。

背景技術

人感染了冠狀病毒后常見體征有呼吸道癥狀、發熱、咳嗽、氣促和呼吸困難等。在較嚴重病例中，感染可導致肺炎、嚴重急性呼吸綜合征、腎衰竭，甚至死亡。雖然目前對于新型冠狀病毒所致疾病沒有特異治療方法，但是輕癥、或者無癥狀患者通過治療可以大大的提高治愈率，縮短治療時間。因此，對患者的檢測或者鑒定變的尤為重要。

快速準確地診斷傳染病是控制疾病暴發的關鍵因素。隨著新型冠狀病毒(2019-nCoV)感染人數的不斷增加，許多體外診斷公司都推出了新型冠狀病毒檢測試劑盒，而許多生物公司則通過提供檢測試劑而加入了競爭。

但是核酸檢測在準確性和靈敏度上還有改進的空間。因此，抗體檢測試劑盒變得更為重要。新型冠狀病毒基因編碼多個結構蛋白，例如N蛋白、E蛋白和S蛋白等，這些蛋白包括多個抗原表位，利用抗原與抗體特異性結合的原理，可通過抗體檢測抗原的存在，從而直接證明樣本中含有新型冠狀病毒。新型冠狀病毒的上述抗原，可作為免疫原，在病毒感染人體后，刺激漿細胞產生特異性抗體，利用抗原與抗體特異性結合的原理，可通過抗原檢測抗體的存在，從而間接證明人體已感染新型冠狀病毒。抗體檢測試劑的適用樣本類型一般為血液，包括血清、血漿和全血。

檢測的抗體主要分為IgM和IgG兩類。目前對新型冠狀病毒的這兩類抗體的產生和持續時間尚缺乏系統性研究。通常情況下，IgM抗體產生早，一經感染，快速產生，維持時間短，消失快，血液中檢測陽性可作為早期感染的指標。IgG抗體產生晚，維持時間長，消失慢，血液中檢測陽性可作為感染和既往感染的指標。

因此，開發抗體檢測試劑盒變得尤為重要。

發明內容

本發明提供一種具有較好免疫原性的冠狀病毒N蛋白，其核苷酸序列如其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示：

其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示：

本發明另外提供一種表達N蛋白的方法，包括克隆所述的N蛋白基因，在大腸桿菌中表達，并純化獲得相應的N蛋白。

本發明另外提供一種制備N蛋白特異性的單克隆抗體的方法，包括以N蛋白作為免疫原進行免疫小鼠，制備并獲得所述的單克隆抗體。

本發明首先用N蛋白免疫小鼠，再用免疫成功小鼠的脾臟淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，通過篩選陽性克隆得到特異性分泌抗N蛋白單克隆抗體雜交瘤細胞株，用于大量生產抗N蛋白單克隆抗體，并通過蛋白純化的方式制備得到高純度的抗N蛋白單克隆抗體。

本發明具體的涉及一種單克隆抗體，其中該抗體的重鏈可變區氨基酸序列為SEQ.ID.NO.9:

QIQLQQSGASLVRPGALVKLSCKASDSHYYSQSLHWVKQRPVQGLEWIGDIGSADNSTKYAPPFLGKAQITADTSSNTAYLQLSSLTSEDTAVYYCIRYASSGWGWGQGTTLTVSS。

輕鏈可變區序列氨基酸序列為SEQ.ID.NO.10: