[發(fā)明專利]一種檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器及其制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010153257.6
• 申請(qǐng)日: 2020-03-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111273014A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-06-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石康中;毛昌杰;柳星培;陳京帥;陳鵬鵬;金葆康
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/574;G01N27/327;G01N27/36
• 代理公司: 安徽省合肥新安專利代理有限責(zé)任公司 34101
• 代理人: 盧敏

1.一種檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于：所述光電化學(xué)免疫傳感器是在FTO玻璃電極的表面覆蓋有類石墨相氮化碳/二硫化錫量子點(diǎn)納米復(fù)合材料，在所述類石墨相氮化碳/二硫化錫量子點(diǎn)納米復(fù)合材料的表面固定有抗前列腺特異性抗原單克隆抗體；所述抗前列腺特異性抗原單克隆抗體可與目標(biāo)物前列腺特異性抗原發(fā)生特異性識(shí)別反應(yīng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于：向所述光電化學(xué)免疫傳感器表面滴加待測(cè)前列腺特異性抗原樣品并孵育后，再滴加修飾有信號(hào)放大因子的抗前列腺特異性抗原多克隆抗體并再次孵育，所述待測(cè)前列腺特異性抗原裸露端與修飾有信號(hào)放大因子的抗前列腺特異性抗原多克隆抗體識(shí)別連接，得到待測(cè)免疫傳感器電極；

對(duì)所述待測(cè)免疫傳感器電極進(jìn)行光電化學(xué)測(cè)試，獲得待測(cè)前列腺特異性抗原樣品的光電流強(qiáng)度，利用光電流強(qiáng)度與前列腺特異性抗原樣品濃度的標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系曲線，判斷待測(cè)前列腺特異性抗原樣品的濃度。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于，所述類石墨相氮化碳/二硫化錫量子點(diǎn)納米復(fù)合材料的制備方法為：

步驟1、將三聚氰胺粉末在550℃條件下煅燒4h，自然冷卻并研磨后，稱取0.5～0.9g加入至150mL乙二醇溶液中連續(xù)超聲4h，獲得的分散液在6000rpm/min條件下離心15～30min，再用超純水離心洗滌；所得離心產(chǎn)物加入至200mL乙醇溶液中連續(xù)超聲24h，所得分散液在9000rpm/min條件下離心20～30min，再用超純水離心洗滌；所得離心產(chǎn)物分散在100mL超純水中，即得到類石墨相氮化碳分散液；

步驟2、向步驟1所得類石墨相氮化碳分散液中加入醋酸，使其體積濃度為5％，然后取用25mL，加入0.5841g四氯化錫五水合物和0.2513g硫代乙酰胺，超聲30min，轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中180℃反應(yīng)12h，自然冷卻后，所得混合液在9000rpm/min條件下離心15min，并用超純水反復(fù)洗滌，所得濕固體35℃干燥過(guò)夜后，即得類石墨相氮化碳/二硫化錫量子點(diǎn)納米復(fù)合材料固體。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于：所述孵育是在37℃下溫育50min，然后取出并用10mmol/L、pH為7.2～7.4的PBS緩沖溶液沖洗；

所述再次孵育是在37℃下溫育70min，然后取出并用10mmol/L、pH為7.2～7.4的PBS緩沖溶液沖洗。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于：所述修飾有信號(hào)放大因子的抗前列腺特異性抗原多克隆抗體是按如下方法獲得：

步驟1、將172μL的三巰基丙酸加入到40mL濃度為20mmol/L的氯化鎘水溶液中，用1mol/L的氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH到11，然后通氮?dú)鈹嚢?5min，再加入40mL濃度為20mmol/L的硫代乙酰胺水溶液，室溫下攪拌均勻；隨后在80℃中反應(yīng)2h，自然冷卻，反應(yīng)產(chǎn)物用乙醇沉降離心一次，再用純水稀釋到16mL，獲得信號(hào)放大因子硫化鎘量子點(diǎn)的溶液；

步驟2、取所述硫化鎘量子點(diǎn)的溶液1mL，室溫下活化后，向其中加入1mL 10μg/mL的抗前列腺特異性抗原多克隆抗體，37℃條件下振蕩2h，再在4℃條件下靜置過(guò)夜，然后加入50μL質(zhì)量濃度2％的小牛血清蛋白溶液，并在37℃條件下振蕩1～2h；所得混合液在4500rpm/min條件下離心15min，所得離心產(chǎn)物用PBS緩沖溶液定容至1mL，即獲得目標(biāo)產(chǎn)物。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)關(guān)系曲線是通過(guò)對(duì)以濃度分別10fg/mL、100fg/mL、1pg/mL、10pg/mL、100pg/mL、1ng/mL和10ng/mL的前列腺特異性抗原樣品所制備的待測(cè)免疫傳感器電極進(jìn)行光電化學(xué)的測(cè)試，獲得各濃度前列腺特異性抗原樣品所對(duì)應(yīng)的光電流強(qiáng)度，然后以前列腺特異性抗原樣品的濃度的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)、以光電流強(qiáng)度為縱坐標(biāo)進(jìn)行擬合獲得。

7.一種權(quán)利要求1～6中任意一項(xiàng)所述的檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器的制備方法，其特征在于，按照如下步驟進(jìn)行：

步驟1、將FTO玻璃電極依次用丙酮、水和乙醇超聲清洗，然后在60℃條件下干燥過(guò)夜，備用；

步驟2、將2mg類石墨相氮化碳/二硫化錫量子點(diǎn)納米復(fù)合材料加入到2mL去離子水中，超聲分散均勻，得到納米復(fù)合材料分散液；

步驟3、在步驟1清洗好的FTO玻璃電極表面均勻滴加30μL步驟2所制備的納米復(fù)合材料分散液，室溫晾干后，得到類石墨相氮化碳/二硫化錫量子點(diǎn)納米復(fù)合材料修飾電極；

步驟4、將步驟3所制備的修飾電極用殼聚糖及戊二醛處理后，在表面滴加30μL、0.01mg/mL的抗前列腺特異性抗原單克隆抗體，4℃反應(yīng)12～13小時(shí)，取出后用10mmol/L、pH為7.2～7.4的PBS緩沖溶液沖洗；然后滴加30μL質(zhì)量濃度為2～3％的小牛血清蛋白溶液，37℃封閉1～2小時(shí)，取出后用10mmol/L、pH為7.2～7.4的PBS緩沖溶液沖洗，即得到檢測(cè)前列腺特異性抗原的光電化學(xué)免疫傳感器。