[發明專利]一種基于納米金-核酸適配體比色檢測洛美沙星的方法

在審

• 申請號: 202010151353.7
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN111190002A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 嚴芬;陳星杭;王梅;劉文靜;吳元子
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N21/31
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 修斯文;蔡學俊

本發明公開了一種基于納米金?核酸適配體比色檢測洛美沙星的方法，其是將金納米顆粒與特異性識別洛美沙星的核酸適配體混合，形成穩定的復合物，然后將其與含洛美沙星的待測樣品混合，使待測樣品中的洛美沙星與核酸適配體結合；再加入陽離子聚合物，使金納米顆粒在陽離子聚合物的作用下團聚成較大顆粒，導致不同波長處的紫外吸收峰強度減弱或增強的特性，從而通過紫外吸收光譜法間接得出待測樣品中洛美沙星的含量。本發明可實現溶液中洛美沙星簡單、快速的測定，且其特異性好、靈敏度高。

技術領域

本發明屬于分析技術領域，涉及一種檢測樣品中洛美沙星濃度的方法，特別涉及一種基于納米金-核酸適配體比色檢測洛美沙星的方法。

背景技術

洛美沙星是一種灰白色至黃色晶體，具有抗菌譜廣、抗菌能力強、體內分布廣、組織穿透性好、半衰期長、不良反應輕、耐藥性小等特點，在臨床上應用廣泛。洛美沙星系喹諾酮類廣譜抗菌藥，對革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌及部分厭氧菌均有殺菌作用，對耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌、耐氨芐青霉素的流感桿菌等細菌的抗菌效果較好。其抗菌機制為抑制細菌DNA螺旋酶的活性，從而抑制細菌DNA轉錄與復制，對多種革蘭氏陽性及陰性細菌均有殺菌作用。洛美沙星因和茶堿無交叉作用，對氣喘患者兼用無禁忌，故特別適合老年人使用。也可用于呼吸道感染、敗血癥、腸炎、尿路感染、婦科疾病感染、眼及口腔感染，還可用于手術后預防感染。但是，近年來國內常有文獻報道其不良反應，發達國家對洛美沙星檢出限的要求也越來越嚴格，其檢測限問題已成為人們關注的焦點。目前洛美沙星的檢測方法分為微生物法、免疫分析方法、色譜法和其他方法。

核酸適配體是指從人工合成的DNA/RNA文庫中篩選得到的一小段單鏈寡核苷酸，它能夠高親和力、高特異性地和靶標分子結合，是化學和生物傳感器的理想識別分子。核酸適配體由于易合成而有很大的優勢，而且其容易被標記，可以長期穩定存儲，具有優良的穩定性、廣泛的適用性以及高敏感特性。因此，它們的優異屬性使其在環境監測、生物分析、醫學診斷方面的應用有很大潛力。

金納米粒子具有獨特的光學特性和較好的生物相容性，已在共振散射光譜、紫外吸收光譜等分析中得到應用，己有研究基于核酸適配體修飾的納米金與共振瑞利散射光譜，實現了對靶分子等的高靈敏度高選擇性的檢測。納米金溶液呈現出酒紅色，少量的鹽離子存在時能誘導金納米顆粒團聚，相對應的溶液顏色會從酒紅色逐漸變為藍紫色。所以在金納米溶液中加入適量的鹽離子聚合物時會引起溶液吸光度的變化。

發明內容

本發明的目的是提供一種基于納米金-核酸適配體比色檢測洛美沙星的方法，以實現溶液中洛美沙星的簡單、快速、高靈敏檢測。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種基于納米金-核酸適配體比色檢測洛美沙星的方法，其包括以下步驟：

1）將75μL、4.7 nM的金納米顆粒溶液（其中金納米顆粒的粒徑大小為13nm）與50μL、400nM的可特異性識別洛美沙星的核酸適配體溶液混合，形成穩定的復合物；

2）在所得復合物溶液中加入50μL含洛美沙星的待測樣品液，使待測樣品液中的洛美沙星與復合物中的核酸適配體結合；

3）加入10μL、450 mM的陽離子聚合物溶液，此時，從復合物中釋放出的金納米顆粒在陽離子聚合物的作用下會團聚成較大顆粒，導致其在不同波長處的紫外吸收峰強度減弱或增強；

4）利用紫外吸收光譜法間接得出待測樣品液中洛美沙星的具體濃度。

所述可特異性識別洛美沙星的核酸適配體的DNA序列為：5’- GCGGCTAGCCTCGCGACTCTTGAAGTTAATAGCCGC -3’，其可以進一步提高本發明方法檢測洛美沙星的效率和靈敏度。

所述待測樣品液中洛美沙星的含量應控制在12.5-400 ng/mL范圍內，該濃度下可以進一步提高本發明方法檢測洛美沙星的效率和靈敏度。