[發明專利]一種用于提高綠藻產油的化學誘導劑的篩選方法及其應用

有效

• 申請號: 202010151260.4
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN111440727B
• 公開（公告）日: 2022-10-21
• 發明（設計）人: 魏東;陳俊輝
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/38;G01N33/50;G01N21/64;C12R1/89
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜

1.一種用于提高綠藻產油的化學誘導劑的篩選方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、初篩誘導培養：將活化的綠藻細胞接種至無氮含糖培養基中并分成n份，然后分別加入濃度為C₁，C₂……C_n的化學誘導劑進行誘導培養，依次得到誘導劑組綠藻細胞A₁，A₂……A_n，同時在相同條件下以不加入化學誘導劑為對照，得到對照組綠藻細胞；其中n ≥ 2，且為整數；濃度C₁ C₂……C_n；

S2、MFI值測定：采用流式細胞儀分別測定步驟S1中得到的誘導劑組綠藻細胞A₁，A₂……A_n以及對照組綠藻細胞內葉綠素的平均熒光強度，依次得到誘導劑組綠藻細胞的平均熒光強度值MFI₁、MFI₂……MFI_n，以及對照組綠藻細胞的平均熒光強度值MFI₀；

S3、初篩判斷：

①若MFI₁ ≥ MFI₀，則說明該化學誘導劑在濃度為C₁時能夠提高綠藻細胞內產油量，反之，若MFI₁＜MFI₀，則說明該化學誘導劑在濃度為C₁時不能提高綠藻細胞內產油量；同理，若MFI₂≥MFI₀，則說明該化學誘導劑在濃度為C₂時能夠提高綠藻細胞內產油量，若MFI₂＜MFI₀，則說明該化學誘導劑在濃度為C₂時不能提高綠藻細胞內產油量；以此類推，若MFI_n≥MFI₀，則說明該化學誘導劑在濃度為C_n時能夠提高綠藻細胞內產油量，反之，若MFI_n＜MFI₀，則說明該化學誘導劑在濃度為C_n時不能提高綠藻細胞內產油量；

和/或，

②將MFI₁、MFI₂……MFI_n進行排序，取最大值，命名為MFI_x，并獲得與MFI_x相對應的化學誘導劑的濃度，命名為C_x；若MFI_x≥MFI₀，則說明該化學誘導劑在濃度為C_x時能夠提高綠藻細胞內產油量，以該濃度為化學誘導劑的最佳誘導濃度；若MFI_x＜MFI₀，則說明該化學誘導劑對綠藻細胞產油量無誘導刺激作用效果；

步驟S1中所述的綠藻為佐夫色綠藻；

步驟S1中所述的化學誘導劑為過氧化氫，丁基羥基苯甲醚，2,6-二叔丁基對甲酚，三甲基甘氨酸，原釩酸鈉，草甘膦，丙酮酸，檸檬酸，蘋果酸，α-酮戊二酸，氯化鎂和氯化鉀中的一種以上；

步驟S2中所述的平均熒光強度值為采用流式細胞儀測定藻細胞在FL3通道的平均熒光強度值；其中，FL3通道的光譜范圍為 670 nm；

所述的用于提高綠藻產油的化學誘導劑的篩選方法，在步驟S3之后還包括復篩的步驟；具體如下：

（I）將活化的綠藻細胞接種至無氮含糖培養基中，然后以步驟S3中獲得的化學誘導物的最佳濃度作為化學誘導物的濃度，對綠藻細胞進行培養，同時以不加入化學誘導劑為對照，得到誘導劑組綠藻細胞和對照組綠藻細胞；

（II）培養結束后測定誘導劑組綠藻細胞的油脂的含量H₁以及對照組綠藻細胞的油脂的含量H₂，和/或測定誘導劑組綠藻細胞的油脂的產量Y₁以及對照組綠藻細胞的油脂的產量Y₂；

（II）若Y₁ Y₂和/或H₁ H₂，則確定該化學誘導劑為可用于提高綠藻細胞的產油量的化學誘導劑；

步驟S1中所述的綠藻細胞的接種密度為2~3 g/L；

步驟S1中所述的誘導培養的條件為：轉速50~500 rpm，培養溫度20~30 ?C，采用白光光源，光照300 ± 30 μmol m^-2 s^-1，培養時間12天以上。