[發明專利]一種治療COVID-19的通用型嵌合抗原受體T細胞的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202010150227.X
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN113355288B
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 李建強;何晉元;王琳
• 申請（專利權）人: 河北森朗生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/62;C12N15/113;C12N15/90;C12N9/22;C12N15/867;C07K19/00;A61K39/00;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 魏少偉

1.一種CAR-T細胞的制備方法，包括：將嵌合抗原受體的編碼基因導入T細胞中并使所述編碼基因得到表達，得到CAR-T細胞；所述CAR-T細胞外含有ACE2或能與SARS-CoV-2特異結合的ACE2片段；

所述嵌合抗原受體為名稱為nCoVS-s-CAR或nCoVS-l-CAR的蛋白質，所述nCoVS-s-CAR為氨基酸序列是序列3的蛋白質；所述nCoVS-l-CAR為氨基酸序列是序列5的蛋白質。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述編碼基因為名稱為nCoVS-s-CAR基因或nCoVS-l-CAR基因的核酸分子；

所述nCoVS-s-CAR基因為編碼序列是序列表中序列4的cDNA分子或DNA分子；

所述nCoVS-l-CAR基因為編碼序列是序列表中序列6的cDNA分子或DNA分子。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述方法還包括敲除所述T細胞中的αβTCR基因和/或向所述T細胞中導入靶向SARS-CoV-2的shRNA的編碼基因并使所述編碼基因得到表達；

進一步，所述敲除所述T細胞中的αβ TCR基因通過向所述T細胞中導入Cas9和靶向于T細胞抗原識別受體（TCR）alpha鏈的一段guide核苷酸序列實現，將這段序列記為gTRAC，所述gTRAC為序列1的第3087-3182位；

所述靶向SARS-CoV-2的shRNA為靶向SARS-CoV-2的RdRp的shRNA；

更進一步，所述shRNA的靶片段為序列2的第3446-3493位。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：所述敲除所述T細胞中的αβ TCR基因通過向所述T細胞中導入Cas9和能使所述gTRAC得到表達的表達盒實現，將該表達盒記為gTRAC表達盒；進一步，所述gTRAC表達盒為序列表中序列1的第2838-3182位所示的DNA片段；

所述向所述T細胞中導入靶向SARS-CoV-2的shRNA的編碼基因并使所述編碼基因得到表達通過向所述T細胞中導入所述shRNA的表達盒實現，將該表達盒記為shRNA表達盒；進一步，所述shRNA表達盒為序列表中序列2的第3197-3493位所示的DNA片段。

5.利用權利要求1-4中任一所述的方法制備的CAR-T細胞。

6.下述M1-M5中任一產品：

M1、權利要求1或2所述嵌合抗原受體；

M2、權利要求1或2所述編碼基因；

M3、與權利要求1或2所述編碼基因的生物材料；所述生物材料為下述C1）至C4）中的任一種：

C1）含有所述編碼基因的表達盒；

C2）含有C1）所述表達盒的重組載體；

C3）含有C1）所述表達盒的重組微生物、或含有C2）所述重組載體的重組微生物；

C4）含有C1）所述表達盒的細胞系、或含有C2）所述重組載體的細胞系；

M4、成套試劑，含有M1、M2或M3；

M5、名稱為pLV-U6-hTRAC-M1904-none或pLV-U6-hTRAC-U6-shCoVRdRp-M1904-none或pLV-puro-EGFP-RdRp或pLV-puro-CoVS的載體，所述pLV-U6-hTRAC-M1904-none的序列為序列表中序列1，所述pLV-U6-hTRAC-U6-shCoVRdRp-M1904-none的序列為序列表中序列2，所述pLV-puro-EGFP-RdRp的序列為序列表中序列7，所述pLV-puro-CoVS的序列為將序列7的第2839-3588位替換為序列8得到的序列。

7.根據權利要求6所述的產品，其特征在于：M4所述成套試劑還包括敲除αβ TCR基因的物質和/或靶向SARS-CoV-2的物質和/或T細胞；

所述敲除αβ TCR基因的物質由Cas9與gTRAC組成，或由Cas9與所述gTRAC表達盒組成；

所述靶向SARS-CoV-2的物質為所述shRNA或所述shRNA表達盒。