[發明專利]小麥紋枯病禾谷絲核菌LAMP檢測引物組及其應用

在審

• 申請號: 202010149570.2
• 申請日: 2020-03-06
• 公開（公告）號: CN111088393A
• 公開（公告）日: 2020-05-01
• 發明（設計）人: 胡艷紅;崔林開;和志華;李夢琪;鄧俊麗
• 申請（專利權）人: 河南科技大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645
• 代理公司: 洛陽公信知識產權事務所(普通合伙) 41120
• 代理人: 時亞娟

本發明涉及小麥紋枯病禾谷絲核菌LAMP檢測引物組及其應用，屬于基因工程技術領域，本發明以該病原菌的ITS為靶序列，建立禾谷絲核菌的LAMP檢測技術，采用的引物特異性強，反應體系的靈敏度高；通過對發病組織的檢測，所述反應體系能夠準確快速地從發病小麥組織中檢測出小麥紋枯病。該檢測方法簡單、快速和靈敏，并且不需要昂貴儀器，有利于在基層植保站大面積推廣和使用，為小麥紋枯病的早期、精準防控提供技術支持。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體地，涉及小麥紋枯病禾谷絲核菌LAMP檢測引物組及其應用。

背景技術

小麥紋枯病是世界范圍內嚴重發生的小麥土傳病害之一，也是我國長江中下游麥區和黃淮麥區的主要病害。主要由禾谷絲核菌（Rhizoctonia cerealis）侵染所引，典型癥狀是葉鞘上形成云紋狀病斑。近年來，由于水肥條件改善和品種矮桿化等因素，紋枯病危害程度逐年加重，已成為影響小麥高產、穩產的重大障礙。目前，小麥紋枯病、小麥全蝕病和小麥根腐病是小麥的主要土傳病害，但是這3種病害在發病初期的癥狀很容易混淆，因此在發病初期準確診斷小麥土傳病害種類對于小麥土傳病害的早期防控十分必要。

環介導等溫擴增 ( Loop mediated isothermal amplification，LAMP) 技術是一種恒溫體外核酸擴增技術。通過針對靶序列的６個區域設計一組４個特異引物，利用具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，在60～65℃恒溫條件下60 min即可擴增出10⁹個靶序列。相比常規PCR檢測技術，該技術具有特異性強、靈敏度高、快速簡便且成本低廉的特點，已廣泛應用于病原微生物的檢測。

發明內容

為了解決現有技術中的問題，本發明的目的一在于提供小麥紋枯病禾谷絲核菌LAMP檢測引物組，目的二在于提供所述LAMP檢測引物組在小麥禾谷絲核菌檢測方面的應用。

為了實現上述目的，本發明采用的具體方案為：

小麥紋枯病禾谷絲核菌LAMP檢測引物組，包括四條特異性引物，具體如下：

WK-FIP：GGATGAAAGAGAAGGTGTGCACATGTAGAGTCGGTTGTAGC；

WK-BIP：CCTGTTTAGACGGTCGAAGGAGATTTTATGTATTGGACGGGAA；

WK-F3：TAGGTGAACCTGCGGAAG；

WK-B3：TGCGTTTACATCGATTACATTC；

所述四條特異引物的靶標基因為小麥紋枯病禾谷絲核菌的ITS。

本發明還提供所述LAMP檢測引物組在小麥紋枯病禾谷絲核菌檢測方面的應用。

有益效果：

本發明是基于小麥紋枯病病原菌的ITS為靶序列和所述的四個特異性引物建立的小麥紋枯病禾谷絲核菌的LAMP檢測技術，其特異性很強，檢測靈敏度也僅為1pg。通過對發病組織的檢測，發現所述反應體系在小麥DNA干擾條件下仍能夠準確檢測出禾谷絲核菌。能準確快速區分檢測出禾谷絲核菌或其他病原菌侵染。本發明所述技術為小麥紋枯病的早期、精準防控提供技術支持。

附圖說明

圖1是LAMP引物的特異性試驗結果圖；其中，1-禾谷絲核，2-小麥全蝕病菌，3-小麥根腐病菌，4-小麥赤霉病菌，5-小麥稈黑粉病菌，6-小麥葉繡病菌，7-小麥條繡病菌，8-小麥白粉病菌，9-整齊小核，10-立枯絲核，11-鏈格孢菌，12-固執腐霉，13-瓜果腐霉，14-大豆疫霉，15-煙草疫霉，16-陰性對照；

圖2是LAMP引物的靈敏度試驗結果圖；其中，N為陰性對照；